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Western Blotting技术服务|实验技术服务

关键词:Western Blotting技术服务|实验技术服务
简介：世界**品牌Western Blotting技术服务|实验技术服务原装**，质量保证,价格优惠。
Western Blotting技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。在获得重组蛋白产品的同时，我们也会提供相应的原始数据和原始图片,不需要再额外花费精力重复实验。另一方面，我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
免疫蛋白质印迹(Western blotting)是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。宝赛生物为您提供全套的常规免疫印记技术服务，同时本公司采用先进的LICOR Odyssey双色红外激光成像系统和双色荧光染料标记的二抗*新推出高灵敏度的红外激光免疫印迹服务。与常规化学发光方法比较，灵敏度可达到皮克级（pg），还具有双色成像、定量**、成像清晰的优点。同时具备功能强大的软件系统，可快速判定样品分子量大小并进行定量分析。
主要实验步骤如下：
1. 蛋白质抽提
a.实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。
b.实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。
2. 蛋白质定量
按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)
将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样，标准加进**个孔中，电泳分离蛋白。
4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜
按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移。
5. 膜的封闭和抗体孵育
a．膜在5％BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
b.封闭过的膜加入**抗体室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。
c.加入HRP标记的二级抗体以结合**抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。。
6. 结果检测
化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7. 数据分析
目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告
包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关图表.

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