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基因组文库(Genomic Library)构建服务|实验技术服务

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测序实验流程：
基因组DNA文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的基因组DNA文库的大小应足够大，以便包括所有的基因DNA顺序。DNA克隆片段也应足够大，其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。为了获得高的克隆效率和较大的插入片段，λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组DNA文库。λ噬菌体文库易于操作，噬菌体载体上有多克隆位点。λ噬菌体能容纳10-50kb插入DNA，载体类型应根据所要基因组DNA的大小和用途来选择。
构建一个基因组DNA文库的基本步骤：
①分离纯化基因组DNA；
②切割DNA成合适大小的片段以用于克隆；
③载体DNA的制备；
④把基因组DNA段和载DNA连接；
⑤包装重组分子；
⑥测定入噬菌体滴度；
⑦扩增DNA文库；
⑧评估文的质量。
基因组文库构建步骤：1、载体：
l噬菌体：48.5kb,插入型(*多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb，*适19-20kb)， EMBL, Charon 粘性质粒(Cosmid)：4-6kb, 质粒+噬菌体的性质，可容纳大片段的外源基因，*多可容纳46kb。酵母人工染色体克隆体系（YAC，Yeast Artificial Chromosome Cloning System）插入大小200—1000kb 2、载体DNA的制备：高分子量的外源DNA 100-150kb载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理 www.cqwestern.com（常用BamHI）（蔗糖密度梯度离心）（碱性磷酸酶） 3、连接和包装：外源片段与两臂之间的比例，包装蛋白 4、感染宿主菌：选择合适的宿主菌，LE392, NM538, NM539, KW251等 5、基因组文库的保存和扩增： 6、测滴度，要在106fu以上
7、保存：氯仿4℃，7% DMSO -70℃
产生DNA段的方法要求切点随机性高，使任一基因都可能被完整地克隆，并且*好在两侧都留有粘性末端以利于 DNA段间的连接。机械剪切方法的优点是随机性高，可是所得片段两端没有粘性末端，有时较为不便与载体连接。用限制性核酸内切酶酶解的随机性较差，但是两端有粘性末端,便于和载体相连接（见重组DNA技术）。

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