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抑制性消减杂交(SSH)技术服务|实验技术服务

关键词:抑制性消减杂交(SSH)技术服务|实验技术服务
简介：世界**品牌抑制性消减杂交(SSH)技术服务|实验技术服务原装**，质量保证,价格优惠。
抑制性消减杂交(SSH)技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
SSH是一项可以快速获取两个不同生物材料中差异表达基因的分子生物学技术，是快速筛选差异表达基因的有效方法，也是寻找新基因的重要手段。该技术尤其适合以genome尚不完全清晰的物种或者以特殊材料为研究对象的科研工作者。
基本流程:通过差减文库构建，文库验证和筛选（逆向斑点杂交），获得阳性克隆，对阳性克隆测序及生物信息分析，可判定差异基因的情况。另外结合RACE技术可进一步克隆所获得的差异基因的cDNA全长序列，并可用Northern blot 或Real－Time PCR加以验证。
客户须知：
1. 客户须在实验开始前确保其提供材料的数量和质量，并提供相关信息。
2. 本公司在收到客户提供的研究材料后会在**个工作日起开始服务工作。
3. 工作完成后，本公司会将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料。
4. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失全部由客户承担。
提供材料具体要求：
客户可以提供（组织、细胞或RNA ）。样品需求量组织（2～ 4g），细胞（108），总RNA（纯化后>200 µg），mRNA （纯化后>2 µg ）。
实验过程折叠编辑本段
抑制性消减杂交技术的基本实验过程如下。
首先，将要进行比较的两种组织或细胞来源的mRNA 样品反转录为cDNA，把含有目的基因的cDNA 称为测试(tester)，把参考cDNA 称为驱动(driver)，用同一种限制性内切酶Rsa I 切割，产生末端平头的片段，将测试cDNA 分为两份，每份连接不同的接头，即接头1(adaptor 1)和接头2(adaptor 2)。接头为双链DNA 片段，且5'- 端均无磷酸基，这样保证只有接头中的长链可以与cDNA 的5'- 末端连接，两个接头含有可识别的序列. 接下来进行两次杂交。**次杂交每个测试里加入过量驱动，然后变性、退火，根据杂交动力学**定律，即丰度越高的分子退火速度越快，因此测试cDNA与驱动cDNA相同片段大都形成异源双链分子，使得差异表达的单链分子得到富集。
**次杂交，将进行过**杂交的两组样品不经变性而直接混合，只有剩下的经过消减并平均化了的差异表达的单链cDNA 可以重新结合为新的杂交体分子，这种杂交体分子两端带有不同的接头1和接头2，加入新鲜变性的驱动进行**轮消减杂交，进一步富集差异表达的杂交体分子，并用DNA 酶补平末端，这样差异表达的测试序列- 杂交体分子5'- 和3'- 端就有了进行巢式PCR 所需的不同的退火位点。
*后，进行两次PCR 反应，**次PCR 只有两端连接有不同接头的双链cDNA 片段才得以指数扩增，而其他形式如一端有接头，而另一端无接头的只能线性扩增，没有引物结合点的不能扩增，还有两端为同一接头的形成袢状而无法获得指数扩增。利用巢式引物进行**次PCR，富集差异表达的基因片段. PCR 产物可以被直接插入T 载体，或者利用接头1 上的NotI/SmaI/XmaI 位点和接头2R 上的EagI 位点进行定向克隆，或者接头与cDNA 连接处的RsaI 位点平端克隆。
然后利用测序和杂交分析来分析差异表达的序列，或者用PCR 产物作探针来筛选DNA 文库。
实验周期：
一般为40个工作日，我们会根据实验进程通知客户，确保客户在**时间知道实验进展状况。
具有以下显著优点：
◇ 操作简便，实验步骤少。只需一轮抑制性差减杂交和选择性扩增差异表达基因就可以完成实验，不需要利用物理方法分离单、双链cDNA。
◇ 对稀有转录本的富集可达1,000倍以上。在完成差减杂交的同时平衡转录本丰度，极大地提高了获得低丰度差异表达基因的几率。
◇ 只需2 μg Poly A + RNA。尤其适用于难于获得RNA的材料。如果只有纳克级的RNA，可以采用 Super SMART™ PCR
cDNA Synthesis Kit 合成高质量的cDNA用于PCR-Select™ cDNA Subtraction Kit 实验。

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