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真菌18S rDNA/ITS菌种鉴定技术服务|实验技术服务

关键词:真菌18S rDNA/ITS菌种鉴定技术服务|实验技术服务
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真菌18S rDNA/ITS菌种鉴定技术服务|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
1. 菌落形态观察
观察菌落的大小、形状、隆起度、边缘、表面性状、颜色与透明度、质地和干湿度。
2. 革兰氏染色
按照革兰氏染色方法进行制片、初染、媒染、脱色、复染、干燥、镜检；干燥后，用油镜观察。
3. 鞭毛染色
挑取18~30 h新鲜平板培养物制备菌悬液，制片，室温自然干燥。滴加硝酸银染色A液覆盖3~5 min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。自然干燥后用油镜观察。菌体呈深褐色，鞭毛显褐色。
4. 糖类分解试验
将被检菌接种于糖发酵培养基中，37℃培养2－3天。如果培养基变黄，说明产酸；如变黄的同时，还有气泡，说明既产酸又产气。培养基仍呈蓝色，说明未产酸。选取木糖、葡萄糖、半乳糖和蔗糖。
5. 吲哚（靛基质）试验
将待检菌种接种于邓享氏蛋白质的胨溶液中，37℃培养1－2天。于培养液中加入戊醇或二甲苯2－3ml，摇匀，静置片刻后，沿管壁加入试剂2ml，如出现红色沉淀，表示为阳性。
6. 淀粉水解试验
将LB琼脂加热融化，使冷到50℃，加入淀粉溶液，混匀后，倾注平板。将细菌划线接种于平板上，37℃培养24小时，生长后取出，在菌落处滴加革兰氏碘液少许，培养基呈深蓝色，能水许解淀粉的细菌菌落周围有透明环。
9. V－P试验
将被检菌接种于试验培养基中（葡萄糖、K2 HPO4、蛋白胨各5g，溶于1 000ml水中，分装于试管中，0.075MPa灭菌10分钟），培养2－7天后，于培养物中加入1ml 10％的NaOH，混匀，再加入3－4滴2%氯化铁溶液。数小时后，培养基表面的下层出现红色者，为阳性。
10.甲基红（M.R）试验
接种细菌，于37℃培养2－7天后，于培养物中加入几滴甲基红酒精溶液（0.1g甲基经溶于300ml 95%乙醇中，加蒸馏水至500 ml），如呈红色，表示阳性。
11. 柠檬酸盐利用试验
将被检菌接种到Simmons固体柠檬酸盐培养基上，37℃下培养2－4天，能利用柠檬酸盐的细菌表现为有细菌生长，培养基变为蓝色，不能利用柠檬酸盐的细菌不生长，培养基不变色。
12. 硝酸盐还原试验
将被检细菌接种于硝酸盐培养基中，37℃培养1－2天，每管中先加入甲试剂0.1ml，再加乙试剂数滴，如出现红色，表示阳性。
13. 接触酶试验
将1ml 3%的H2O2倾注于生长物（菌落或菌苔）上，有气泡（O2）发生者为阳性。也可于清洁小试管中加少量H2O2（30%），再用清洁无菌的细玻棒（或火焰封口的毛细管或镍铬做成的接种环）醮细菌少许，插入H2O2液面下，有气泡者为阳性。也可在玻片上滴一滴H2O2 蘸取少许培养物，混合，有气泡者为阳性。
送样要求
1.若提供平板、甘油菌或穿刺菌，请注明培养条件，菌种培养需特殊培养基的请提供培养基；请确保您提供的平板或斜面上的单菌落经过至少三次的分离纯化。因实验样品不纯造成的测序套峰，我们将收取全额的实验费用。
2.若提供基因组DNA样品，请确保其浓度≥10ng/μl，总体积≥50μl，样品定量检测结果将以我们为准。
3.若提供的菌株为革兰氏阳性菌，建议您提供基因组DNA。
4.若提供的为培养后的菌液，请确保包装的密封性和菌液的浓度，使*终离心后菌体质量不低于0.5g。
提供结果
1. 结题报告，包括实验流程，PCR产物电泳图、进化树结果等
2. 测序峰图文件
3. 序列文件

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