↓ 加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）
↓ 于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标**抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,*后一遍用DDW洗涤。
↓ 其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。