光阴荏苒,岁月如梭,做实验的时光总是过得特别快。转染后的细胞筛选,动辄几个星期,多则数月,真是急得人直跳脚。MACSelect的登场,让一切问题都迎刃而解了。
德国美天旎公司推出的MACSelect™系统,是一种转染细胞分选系统,可以磁性富集已转染的哺乳动物细胞。无论是原代细胞或难转的细胞系,也不论是贴壁或悬浮细胞,在常规转染后都能分选。高比例的阳性细胞和小的非转染细胞的背景,增加了下游的分析显著性和可靠性。
无论你进行功能基因分析、药筛、报告基因检测,还是RNAi,转染都是必不可少的步骤。那么,试试MACSelect吧,3小时筛选出转染细胞,花少的时间获得大的结果!
与耗时的***筛选相比,使用MACSelect技术,仅需3小时就能挑选出转染阳性细胞。重复的MACSelect挑选,可得到稳定表达的细胞系。温柔的MACS磁珠极小,直径仅有50 nm,对细胞无毒性,不影响细胞功能,还能降解。筛选出的细胞能直接进行功能研究或细胞培养。同时,你也无需改变转染方法。只要加入MACSelect的筛选标志,任何转染方法:电转、磷酸钙、脂质体或核转染都OK。
MACSelect是一个聪明的系统。选择标志物共表达在细胞表面,已转染的细胞可通过磁性标记从未转染的细胞中分选出来。所有的pMACS载体编码的表面标志物都删除了胞内domain。使用pMACS载体和表达载体的共转是简单的 MACSelect系统使用方法。当然,也可以把基因克隆到pMACS载体进行单转。
美天旎提供的筛选标志有三种:CD4、H2-KK、LNGFR。MACSelect 4 系统使用修改的人CD4分子作为选择标志物。它适用于CD4阴性细胞系。MACSelect KK系统使用修改的小鼠MHC I分子H-2KK作为选择标志物。仅有极少的鼠系细胞表达H-2KK,因而其可用于几乎任何哺乳动物细胞。MACSelect LNGFR系统使用的人低亲和度神经生长因子受体(LNGFR)分子经过修改。表达LNGFR分子的细胞有:**和外周神经系统细胞,骨髓成纤维细胞,滤泡树突状细胞和一些间充质细胞。因此,载体也有常规和双顺反子两类。
几个小时后,转染后的细胞就被MACSelect磁珠标记上,并通过磁性作用在MACS的柱上进行分离。如果是手动操作,MS或LS柱加MACS分离器就行,如果是高通量的分析,autoMACS将是个不错的选择。
MACSelect的步骤