大量的证据表明,miRNA表达的失调是一些**过程(包括许多癌症)的起因或指示剂。研究还发现血清和血浆中可以检测到循环miRNA,且它们的表达因**而异,这一发现说明循环miRNA的表达特征可作为**诊断和预防的生物标志物,具有巨大潜力。
miRNA研究的成功依赖于高性能工具和技术的使用。Qiagen是一个一站式供应商,满足您在miRNA纯化、定量和功能鉴定上的所有需求。欢迎访问QIAGEN的GeneGlobe® 网页(www.qiagen.com/GeneGlobe),订购miRNA特异的产品,并发现大量宝贵的基因信息、通路信息和生物信息学工具。
QIAgen提供了以下方案:
一、miRNA纯化
利用miRNeasy Kits和PAXGENE® Kits纯化高质量总RNA,包括miRNA。
二、miRNA表达谱分析
利用miScript® miRNA PCR Arrays快速分析整个miRNA组(miRNome)或通路聚焦的miRNA分析板
三、miRNA生物发生和调控研究
利用miScript PCR System同时定量成熟的miRNA(联合miScript Primer Assays)、前体miRNA(联合miScript Precursor Assays)和mRNA目标(联合QuantiTect® Primer Assays)。
四、miRNA功能分析
利用miScript miRNA Mimics、Inhibitors和Target Protectors确定miRNA的功能。
miRNA的纯化
高质量miRNA纯化
高质量的总RNA(包括miRNA)的纯化,是成功的miRNA定量实验的前提条件,因为质量不佳的RNA会阻碍酶促反应,且小RNA的低效纯化会导致不准确的结果。为miRNA纯化而推出的miRNeasy 和PAXgene miRNA Kits 确保您的实验有高质量的RNA。miRNA产量优于其他miRNA纯化方法,如苯酚抽提和沉淀。如有必要,miRNA纯化也可在QIAcube®或QIAsymphony® 仪器上自动开展(如需更多信息,请访问http://www.qiagen.com/default.aspx)。
总RNA的纯化或miRNA的富集
miRNeasy 和PAXgene miRNA Kits 可纯化总RNA,包括~18 nt以上的RNA。另外,对于所有样品类型,除包含严重降解RNA的样品(如FFPE组织)和包含少量大RNA(如血清/血浆样品)的样品外,miRNeasy Kits可分别纯化富含miRNA的组分(< ~200 nt)和总RNA组分(> ~200 nt)。利用miRNeasy 和PAXgene miRNA Kits 纯化得到的RNA适合各种下游应用,如northern blot分析、芯片分析及实时定量RT-PCR。在某些应用(如一些芯片系统)中,小RNA的富集可降低背景,但利用miScript miRNA PCR Arrays 和miScript Primer Assays 的分析则不需要。
从组织和细胞中高效纯化
miRNeasy Mini、Micro和96 Kits 可从组织和细胞中高效纯化RNA,即使所用的起始材料量很少。RNA可从各种组织和细胞中纯化,包括难以裂解的组织。包括miRNA在内的总RNA纯化实现了miRNA与那些目标mRNA、参照看家基因或其它目的mRNA表达水平的直接比较。
从血清或血浆中纯化循环miRNA
循环miRNA可作为检测不同癌症及其他**(如糖尿病)的潜在生物标志物。利用从血清或血浆中纯化得到的RNA,研究已发现一些miRNA在一些癌症中的独特表达。miRNeasy Serum/ Plasma Kit 能够从少量的血浆或血清中纯化总RNA。miRNeasy Serum/Plasma Spike-In Control提供了一个合成的加标对照,适用于研究血清或血浆样品时的标准化。纯化得到的RNA之后可用于miScript PCR System,以发现生物标志物。
从FFPE切片中获得高纯度RNA
交联和片段化让FFPE切片的核酸纯化**挑战性。miRNeasy FFPE Kit 提供了特殊的裂解和孵育条件,对RNA解交联,并有效纯化RNA,同时避免RNA的进一步降解。为了去除痕量的小DNA片段,以免妨碍下游分析(如实时定量RT-PCR),RNA经过DNase 和DNase Booster Buffer 处理,此缓冲液优化了DNase反应。利用miRNeasy FFPE Kit 制备的总RNA随后可用于miScript PCR System,以释放宝贵的表达数据。