小分子RNA研究热度不减,从早先的sirna到目前大热的miRNA,一波接一波。对于小分子RNA的转染,大部分研究人员使用的是阳离子或两性分子脂类转染试剂。
转染过程大多很简单:混合核酸和转染试剂,等几分钟,加到细胞中,几天后分析。但是你得做好优化的准备。我们的目标是用恰恰好的试剂导入恰恰好的siRNA,在沉默目的基因的同时又不会产生脱靶效应。但是何谓之恰恰好,这就很难把握。根据细胞类型、汇合度、小分子RNA浓度、平板类型的不同,转染效率可能差异很大,所以你必须得优化。
市场上主流的小RNA转染试剂有Life Technologies的Lipofectamine™ RNAiMAX、Qiagen的HiPerFect、Thermo Scientific的DharmaFECT、罗氏的X-tremeGENE siRNA转染试剂及Bio-Rad的siLentFect™ 等。此次将它们集合起来,并奉上参数和价格,方便大家比较。
1、产品名:Lipofectamine™ RNAiMAX
性价比高!
厂家:Life Technologies(invitrogen)
优点:较低浓度的RNA分子也能带来高的转染效率,在10倍浓度范围内轻松优化
简介:Lipofectamine™ RNAiMAX转染试剂是一款RNAi特异的阳离子脂质体试剂,可以高效地将小分子RNA导入多种细胞类型。尽管Lipofectamine™ RNAiMAX的说明书建议以10nM siRNA 作为优化干扰效果的起始浓度,但是仅用1nM siRNA 也可以获得较好的靶基因干扰效果。
Lipofectamine™ RNAiMAX 转染试剂可以在10倍的浓度范围内获得大的干扰效果以及**的细胞存活率,这个特点使得Lipofectamine™ RNAMAX的转染条件极易优化,以便在实验中使用低的siRNA浓度,从而降低细胞毒性。不过,这款试剂只能用于小RNA的转染,不能用于共转染。如果需要共转染,只能借助经典的Lipo 2000。
操作流程(顺式转染):用Opti-MEM分别稀释RNA分子和Lipofectamine RNAiMAX,将两者混合,室温下孵育10-20分钟。加入培养细胞中,在37°C孵育24-48小时。
细胞特异的步骤:可在网站上搜索到,地址为:www.invitrogen.com/RNAi。按照细胞系名称排列,找起来还算方便,但DNA和RNA的转染都混在一起,还要仔细分分,有时会眼花。
价格:4190元/0.75 ml,7200元/1.5 ml(24孔板的每孔建议用量为1 μl)虽然目录价看上去贵一些,但实际用量较省,因此综合来看性价比较高。
2、产品名:HiPerFect Transfection Reagent 使用方便!
厂家:QIAGEN
优点:细胞存活率高,快速反式转染,适合高通量的RNAi筛选,细胞特异的步骤详细
简介:HiPerFect Transfection Reagent是一种阳离子和中性脂类的独特混合物,能实现高效的siRNA吸收和细胞内siRNA的高效释放,即便使用低浓度的siRNA,也能产生高的基因knockdown。HiPerFect Transfection Reagent非常适合高通量的反式转染,也适合miRNA研究。
操作流程(传统步骤):用不含血清的培养基稀释siRNA,加入HiPerFect转染试剂,在室温下孵育5-10分钟。逐滴加入细胞,在正常条件下培养,监控基因沉默。
细胞特异的步骤:使用手册中详细列出了几大类细胞的实验步骤,包括贴壁细胞、悬浮细胞和巨噬细胞,以及原代细胞。例如Jurkat、HUVEC、上皮细胞、平滑肌细胞等常用细胞的转染步骤,无需在网上费力搜索,都可在使用手册中轻松找到。另外,还有一些原代细胞培养和转染的建议。如果你的细胞未包括在实验手册上,那么可在转染细胞数据库(www.qiagen.com/TransfectionCellDatabase)中查找,也相当方便。
价格:530元/0.1 ml,1670元/0.5 ml,2960元/1 ml,10450元/4×1 ml(24孔板的每孔建议用量3 μl)
3、产品名:X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent 适合共转染!
厂家:Roche
优点:高效转染siRNA,siRNA或siRNA-质粒的共转染,灵活性高
简介:X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent是一个基于脂质体的、并经过优化的转染试剂。虽说名字上写着siRNA,但它也能用于siRNA和表达质粒的共转染。它能和小干扰 RNA(siRNA)或siRNA/质粒DNA混合物形成复合物,并高效地转入动物细胞,引发相应的基因沉默。相对较小的细胞内毒性,确保观测到的细胞效应仅同转染或共转染的siRNA相关。有无血清均可进行转染,转染后无需进行换液操作。
操作流程:用无血清Opti-MEM分别稀释X-tremeGENE siRNA 转染试剂和siRNA,混合并在室温下孵育15-20分钟。加入细胞,监控干扰效果。
细胞特异的步骤:在罗氏的转染数据库中,可以根据细胞名称搜索相关的转染步骤,使用下拉菜单,比较方便。但网站上没有提供具体的步骤,而是链接到相关文献,需要自己再去找。
价格:2411元/1 ml,10256元/5×1 ml(24孔板的每孔建议用量为2.5 μl)
4、产品名:DharmaFECT 1、2、3、4 Transfection Reagent 选择面广!
厂家:Thermo Fisher Scientific
优点:有4种试剂可供选择,选择面广
简介:DharmaFECT 的阵营为强大,以4敌1,自然占尽上风。众所周知,单一的转染试剂不可能满足上百种细胞系对siRNA的转染要求;因此,Dharmacon通过对上百种细胞系/株逐个筛选和优化,开发出了适合特定细胞系/株的转染试剂,满足更大范围的细胞系/株对siRNA的高效转染需求。不过,一下子来了四种,选择起来也有点麻烦。幸好,Dharmacon根据客户的使用反馈情况收录了这4种转染试剂对绝大部分细胞的成功转染情况,整理成表,供客户参考选择。
操作流程(共转染):用无血清培养基稀释siRNA和DharmaFECT转染试剂,室温孵育5分钟,混合后室温孵育20分钟,加入无***的完全培养基。换成转染培养基,在37°C孵育24-48小时或更长。
价格:1200元/0.2 ml,3300元/0.75 ml,5400元/1.5 ml(24孔板的每孔建议用量为0.25-2.5 μl)
5、产品名:siLentFect™ reagent 便宜!
厂家:Bio-Rad 索取资料
简介:siLentFect专门为RNA干扰实验设计,可将小分子干扰RNA高效转入培养的哺乳动物细胞。 siLentFect**的siRNA 吸附能力和高效的转化效率可以在使用低转染试剂剂量和低siRNA浓度的条件下实现目的基因的沉默。siLentFect 脂质试剂能够有效地将siRNA 转到很多细胞系中,包括难于转染的初代细胞和非标准细胞系如 MCF–7 等。siLentFect 对siRNA高的吸附能力确保每次实验使用较少的脂质试剂和较少的siRNA 用量,降低了脱靶效应的可能性,同时也减少了花费。它也可以用于siRNA和质粒DNA的共转染。
操作流程:用无血清培养基分别稀释siLentFect转染试剂和siRNA,混合并在室温下孵育20分钟。加入细胞,监控干扰效果。
细胞特异的步骤:暂无。说明书上只列出了一般的操作步骤,建议以此为起点自行优化。
价格:2275元/0.5 ml,3733元/1.0 ml(24孔板的每孔建议用量为0.75 μl)
转染试剂的比较本身就是一件很难的事情,因为甲之砒霜,乙之蜜糖,很难评出一个综合**。大家可以根据有无细胞特异的步骤、价格、共转染等要求来综合选择一个。希望本文对您的选择有小小帮助,也欢迎您将使用情况反馈给我们。