各种ALEXA FLUOR染料的强大应用剖析

本文的内容围绕Alexa Fluor染料的优点、Alexa Fluor染料可替代的荧光染料、各种Alexa Fluor 染料的光谱特性，为您展示Alexa Fluor 这一荧光标记试剂明星产品的强大功能和广泛应用潜力所在。

Alexa Fluor 是荧光标记试剂的一大突破，涵盖了从近紫外、可见光，到近红外光谱的一系列荧光染料，其代表了荧光标记试剂发展的一个重大突破，并产生了目前为止我们测试过的，好亮的复合物。作为新一代染料，Alexa Fluor 染料系列及其复合物，能为您解决荧光染色常见问题。

Alexa Fluor 的优点如下：

• 亮度 — Alexa Fluor 偶联物相比其他染料荧光更强。

• 光稳定性 — Alexa Fluor 偶联物相比其他染料光稳定性更强，提供更长的图像捕获时间。

• 仪器兼容性 — Alexa Fluor 偶联物的吸收光谱与普通激发光源的主要输出波长相匹配。

• 多种颜色 — Alexa Fluor 偶联物有蓝色到红色的多种直接荧光.

• pH 值不敏感 — Alexa Fluor 染料在一个广泛的pH 范围内保持强荧光.

• 水溶性 — Alexa Fluor 反应性染料有良好的水溶性, 无需有机试剂即可结合蛋白, 且储存不易产生沉淀.

Alexa Fluor 染料的光谱特性:

•Alexa Fluor 350— 亮蓝和紫外光激发

Alexa Fluor 350 的蓝色荧光比AMCA 亮50%，而且大发射波长稍短(为442nm ，AMCA 为448nm)，因此更容易与现有的绿色荧光基团区分。

• Alexa Fluor 405 —近乎**的匹配蓝色二极管激光器

Alexa Fluor 405 的激发/发射**长为402/421 nm，与近来使用的荧光显微镜和流式细胞仪405nm谱线的蓝色二极管激光器近乎**的匹配。Alexa Fluor 405 琥珀酰酯是Cascade Blue 的氨基反应性衍生物，后者是乙酰叠氮化物。Alexa Fluor 405琥珀酰酯纯度更高且有一个4-**羧酸的间隔，使得荧光基团与其偶联的生物分子之间的反应性小化。

•Alexa Fluor 430—高斯托克斯频移的430 nm吸收少数 400nm ~ 450nm 吸收的染料在水溶液中可测荧光偏离500nm。Alexa Fluor 430 弥补了这一缺陷，430nm激发时发射在540nm附近。

•Alexa Fluor 488—好的绿色荧光基团

Alexa Fluor 488 偶联蛋白优于其他荧光素，实验证明比包括Cy2 的其他绿色荧光基团都好。不仅亮度更高，而且光稳定性更好。在pH4～10 保持稳定是另一优越之处。

• Alexa Fluor 532 —适于532 nm 激发光源的染料

激发发射波长位于绿色荧光Alexa Fluor 488 和橙色荧光的Alexa Fluor 546 之间，适用于双频Nd:YAG激光器在内的532 nm 激发光源。

•Alexa Fluor 546—Cy3 和四甲基罗丹明的替代物

Alexa Fluor 546 标记的偶联物良好应用于橙色范围光谱，比四甲基罗丹明(TRITC 、TAMRA) 及Cy3 荧光更强，容易被汞弧灯激发，发射波长546 nm。

•Alexa Fluor 555—优于Cy3 的替代物

Alexa Fluor 555 与Cy3 偶联物的光谱相匹配，因此适用于Cy3 的滤光器。Alexa Fluor 555 的总荧光更强，且光稳定性更好，为研究者提供了更长的图像捕获时间。

•Alexa Fluor 568 —适于568 nm 激发光源

Alexa Fluor 568 的橙红色荧光适用于激光共聚焦显微镜的Ar–Kr 混合气体激光器，其发射的谱线为568nm。与具有相似大激发/发射波长的Lissamine Rhodamine B 和Rhodamine Red-X 相比， Alexa Fluor 568的偶联物亮度更高。

• Alexa Fluor 594 —优于Texas Red 的替代品

Alexa Fluor 594 偶联物发出红色光，可与绿色荧光探针一同用于多色标记实验。比Texas Red 偶联物有更高的亮度。

• Alexa Fluor 610—Alexa Fluor 好的红色染料

Alexa Fluor 610 亮度高、光稳定， 可用检测 Texas Red 和Alexa Fluor 594 的光学元件检测。前身是FRET-based Alexa Fluor–phycobiliprotein 的受体染料。新的Alexa Fluor 610 激发/发射波长为612/628nm，容易与绿色荧光基团相区分，适用于多色标记。Alexa Fluor 610 仍为人眼可见，优于Alexa Fluor 633和其他更长波长的荧光团。

• Alexa Fluor 633 —光稳定性更强

远红光染料近来大受欢迎，是因为它们的光谱范围在大多数样品的自发荧光之外。He–Ne 激光器 633 nm 和红色二极管激光器635 nm 谱线的广泛应用加速了兼容染料的开发。Alexa Fluor 633 偶联物具有亮度和光稳定性，吸收峰在632 nm，发射峰在650 nm。

•Alexa Fluor 635 —He–Ne 激光器633 nm 线的佳染料

新的 Alexa Fluor 635 染料，其偶联物比Alexa Fluor 633 亮度更高，因为它的吸收光谱不会象Alexa Fluor 633、Cy5 和tetramethylrhodamine 那样分成两个峰。Alexa Fluor 635 同样适用于He–Ne 激光器的633 nm谱线和红色二极管激光器的635 nm 谱线，吸收峰在633 nm，发射峰在647 nm。

• Alexa Fluor 647 —优于Cy5 的替代品

Alexa Fluor 647 与Cy5 偶联物的光谱及滤光器相匹配。Alexa Fluor 647 二抗偶联物的总荧光亮度高于其他公司的Cy5 偶联物。在与大多数的蛋白质、寡核苷酸和核酸结合时，Alexa Fluor 647 相比Cy5 荧光吸收光谱波动很小，因此在同等程度的替换时发出的荧光更强。

• Alexa Fluor 680 —Cy5.5 的替代物

Alexa Fluor 680 的激发峰在679 nm，大发射为702 nm，与Cy5.5 类似。Alexa Fluor 680 能够很好的与其他红色荧光团区分，如 Texas Red, R-phycoerythrin, Alexa Fluor 594 和Alexa Fluor 647，是理想的三色与四色标记用染料。

•Alexa Fluor 700 —远红光二极管激光器的适染料

Alexa Fluor 700 大吸收在696 nm，能够被675–700 nm 范围的氙弧灯、远红外二极管激光器或dye-pumped lasers 激发。发射光在红外区，峰值为719 nm。

•Alexa Fluor 750—Alexa Fluor 长波长的产品

Alexa Fluor 750 是目前的Alexa Fluor 系列产品中波长长的产品，与Cy7 光谱相似。其发射的**长为779 nm，能够和Alexa Fluor 647 及allophycocyanin (APC)区分，适合多色分析。Alexa Fluor 700偶联物 752 nm 的大激发光使其适用于720–750 nm 范围的氙弧灯或dye-pumped lasers。

成功的实验都是相似的，不成功的实验却各有各的问题所在。每一次的**标记实验都会或多或少遇到些耽误进程的问题，希望本篇介绍的Alexa Fluor能够实实在在帮您减轻实验中的烦恼。