等密度离心法是在离心前预先配制介质的密度梯度，此种密度梯度液包含了被分离样品中所有粒子的密度，待分离的样品铺在梯度液顶上或和梯度液先混合，离心开始后，当梯度液由于离心力的作用逐渐形成底浓而管顶稀的密度梯度，与此同时原来分布均匀的粒子也发生重新分布。
当管底介质的密度大于粒子的密度，即ρp <ρm时粒子上浮;在弯顶处ρp >ρm时，则粒子沉降，后粒子进入到一个它本身的密度位置即ρp =ρm时，dx/dt为零，粒子不再移动，粒子形成纯组份的区带，与样品粒子的密度有关，而与粒子的大小和其他参数无关，因此只要转速、温度不变，则延长离心时间也不能改变这些粒子的成带位置。
一般在物质的大小相近，而密度差异较大时应用此法。常用的梯度液是CsCl。
