一、线性的定义
紫外可见分光光度计的线性是指实验点接近或偏离比耳定律A = f ( C) 直线部分的程度。换言之, 如果给定化合物的两个浓度的响应值之差正比于两个被测试样的浓度差, 且该差值在误差要求的范围内, 则可认为紫外可见分光光度计的输出是线性的。
二、线性对分析测试误差的影响
紫外可见分光光度计的线性在定量分析工作中有着极其重要的意义。Joh nson、Scot t、Mun k 等人曾多次指出, 如果仪器的线性很差, 就不可能得到好的定量分析结果。作者在实践中发现, 在给定仪器的情况下( 即仪器的噪声为“ + ” 值时) , 当被测试样的浓度小到一定程度时, 实验结果偏离比耳定律的直线而明显地向上弯曲, 反之则向下。作者用自制的UV/ FL-1 型紫外/ 荧光分光光度计测试浓度为4. 06×10 - 6 g/ ml 的K2 CrO4 时, 因仪器“ + ”噪声的影响, 产生的吸光度相对误差( 正偏差) 达25% , 即真值为0. 0052A实测为0. 0056A。而当浓度增大到2. 01×10 - 3 g/ ml 时, 因杂散光的影响, 实测K2 CrO4 的吸光度误差达到36% ( 负偏差) 。因此, 在定量分析时, 必须严格注意仪器的线性, 否则不能得到好的分析结果。
三、仪器线性的测试方法
在正式使用一台新的仪器以前, 一般都先对仪器的线性进行测试。但大多数使用者只是在某一试样的某一浓度附近, 用浓度的倍数变化, 测出这一段的线性。这只能反映仪器在小范围内的实用情况, 并不能说明仪器的线性是否符合出厂指标, 也不能反映仪器的线性范围。为了**了解紫外可见分光光度计的线性, 还需按下述方法进行测试。
测试紫外可见分光光度计线性的方法很多, 常用的大致有以下6 种:
1. 溶液稀释法
溶液稀释法的具体作法是将铬酸钾( K2 CrO4 ) 稀释到不同浓度, 测量不同波长处的吸光度值(一般需测量85 个吸光度值) , 然后, 根据此数据作曲线, 再根据曲线来判断紫外可见分光光度计的线性。
2. 中性滤光片法
一般以3 块中性滤光片叠加, 比较测定值与计算值之差来判断紫外可见分光光度计的线性。
3. 百分法
百分法是将被测试样的浓度成倍增加, 测其吸光度, 作曲线, 判断实验值偏离比耳定律直线部分的程度。
4. 改变样品池厚度法
用不同厚度的样品池来测量铬酸钾( K2 CrO4 ) 的吸光度, 以此来判断紫外可见分光光度计的线性。
5. 旋转扇形板法
以不同透射率的扇形板在样品光束中旋转, 测出各点透射率与真值进行比较; 以此来判断紫外可见分光光度计的线性。
6. 光叠加法
利用孔规来分段测试, 然后作曲线判断紫外可见分光光度计的线性。
