ELISA操作过程多,新手操作难免会有过错。而这些过错许多是由细节不够好形成的,减少过错的办法有许多,比方做试验时少说话,避免唾液掉进酶标条中。当然,大家还要学会自己开掘问题,找出原因。今天教您怎么完善ELISA试剂盒试验中的过错?
1,评价试剂的实用性,试剂的安稳与否,对准确率的凹凸到头重要。在试剂启用前,应进行阴、阳对照及样品重复比照试验,判定试剂符合要求后方可运用。
2,操作前仔细阅读说明书,严厉按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不行混用。值得改善的地方,重复试验确认建立后才能改善,比方洗板次数的掌握等。
3,加样要准确、快速。加样不准确,酶生成物的量不能确认,直接影响显色成果。别的,显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和停止液的量有关,所以加样应慎重。要求在必定时刻内加样完毕的试验,如果加样缓慢,便出现误差,而且试剂长期暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短乃至失效。
4,检验技师应具有从事试验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作试验仪器、器械,具有必定总结和剖析问题的才能,对试验中出现的意外状况能及时妥善解决。
5,运用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。
6,严格掌握显色时刻,显色时刻过短,加入停止液反响停止后,底物结合物的量过少,易出现假阴性。超过显色要求时刻后显色,应判为假阳性,这或许与试剂自身有关。加显色剂后当即显色,不行报阳性,这或许是本底显色的成果。
7,洗刷完全,洗板不完全,ELISA试剂盒酶结合物本底显色会出现假阳性。别的,洗刷液要新鲜,现用现配,陈腐的洗刷液会出现本底增高现象,也或许出现假阳性。
8,严控反响时刻,反响时刻过长,酶失活;反响时刻过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充沛结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都或许形成假阴性。