ELISA阴性值偏高是什么原因
你的空白值是多少呢?如果空白值也是0.1那可能是有非特异性吸附.你可以尝试不包被抗原,直接封板子加二抗,看看还显不显色,有时二抗会有非特异性吸附的.如果是非特异性吸附，可以用封闭液来稀释一抗和阴性，这样可以起到封闭非特异性吸附的作用。
ELISA显色深浅除了和抗原抗体特异性结合有关外，还和酶标板的物理吸附能力有很大的关系。还有一点就是象棋筛子说的，阴性稀释倍数大了也有可能会显色，阴性稀释倍数与一抗的稀释倍数*好相同，这样才有可比性。
我的程序：
4度包被过夜—PBST洗2-3遍
—加封闭液，37度1小时——洗2-3遍
——加血清，PBS稀释血清，37度2h——洗5遍
——加二抗，37度1h——洗5遍
——OPD显色
阴性孔没加血清，PBS代替，其他和样品孔相同。
个人认为造成阴性值偏高的主要原因有以下几种可能：
1 阴性标本污染，赶紧换一批标本
2 ELISA系统问题：a 显色时间过长，尽量保持每一次显色时间一致
b 二抗的非特诣性吸附，所以每次可做二抗测试
3 硬件问题---酶标板，国外吸附性太强，国内的批间差诣等等
