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石蜡切片做**荧光,分享

发布时间:2017-06-21

石蜡切片做**荧光,分享

1,烤片,在恒温箱中58摄氏度20分钟。

2,脱蜡和水化。

三桶二甲苯,分别浸泡15分钟。

100,95,85,70四桶酒精,分别浸泡5分钟。

然后在水龙头下,流水冲洗10min。

3,修复,我是用的柠檬酸缓冲液ph6的,高压修复,高压锅喷气后3分钟。然后取出来自然降温(我是浸泡在冷水中)。用PBS洗10min,三次。

4,甩干液体,用**组化笔画圈。

5,0.2%的Triton破膜(我染的核蛋白),15min。

6,3%双氧水阻断,30min,然后PBS洗10min,三次。

7,5%BSA封闭1小时。

8,甩干液体,用1%BSA配一抗。室温30min。然后4度冰箱过夜。

9,**天取出,室温30min,PBS洗15min,三次。

10,甩干液体,避光加稀释的二抗,孵育1小时,避光PBS洗15min,三次。

11,用DAPI染核,PBS洗。

12,加防粹灭剂,封片。

在荧光显微镜下看。


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