石蜡切片做**荧光,分享
1,烤片,在恒温箱中58摄氏度20分钟。
2,脱蜡和水化。
三桶二甲苯,分别浸泡15分钟。
100,95,85,70四桶酒精,分别浸泡5分钟。
然后在水龙头下,流水冲洗10min。
3,修复,我是用的柠檬酸缓冲液ph6的,高压修复,高压锅喷气后3分钟。然后取出来自然降温(我是浸泡在冷水中)。用PBS洗10min,三次。
4,甩干液体,用**组化笔画圈。
5,0.2%的Triton破膜(我染的核蛋白),15min。
6,3%双氧水阻断,30min,然后PBS洗10min,三次。
7,5%BSA封闭1小时。
8,甩干液体,用1%BSA配一抗。室温30min。然后4度冰箱过夜。
9,**天取出,室温30min,PBS洗15min,三次。
10,甩干液体,避光加稀释的二抗,孵育1小时,避光PBS洗15min,三次。
11,用DAPI染核,PBS洗。
12,加防粹灭剂,封片。
在荧光显微镜下看。