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方阵滴定确定*佳条件时,为什么选择OD值在1.0左右

发布时间:2018-01-04

方阵滴定确定*佳条件时,为什么选择OD值在1.0左右

一般现在酶标仪OD*大测到3左右,所以只要不高于这个就可以,保险起见,可选择2.0左右OD区间大,ELISA的工作浓度范围也自然大点.

个人觉得棋盘ELISA一定要选择OD1.0的点是个误区。首先不同型号的灵敏度应该是不一样的;其次OD为1.0指的是某个抗原抗体浓度条件下的OD值,并不代表通过此次棋盘得到的*佳抗原抗体的浓度所做的各种后续ELISA实验的值也是1.0左右,所以说选择处于酶标仪灵敏度的*佳状况并不一定符合后续的实验。(不善表达,不知自己描述清楚没有)

我自己觉得要根据不同的实验类型(间接,双抗夹心或是竞争等)来选择*佳抗原抗体工作浓度。象竞争ELISA,做棋盘的目的是包被抗原和一抗的量,试想如果包被抗原太浓,意味着需要竞争抗原浓度也不能小(毕竟是竞争对手不能悬殊太大),这就注定了竞争ELISA的检测限不好(因为竞争抗原往往是要检测的东西,所需浓度越大IC50也就越大)。而一抗也不能足量,否则即能与包被抗原反应又能与检测抗原反应,就不能称为竞争ELISA了。也不能太少,否则整体OD读数太低。

双抗夹心ELISA也是同样的道理,找到包被抗体和酶标抗体的平衡点,即能OD与本底之间的平衡点。

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