MS培养基配制标准操作程序
实验步骤
1 MS培养基母液的母液的配制
由于组培的植物不同，需要配制不同的培养基，为减少工件量，可把药品配成浓缩液。有些微量元素和有机成分成分浓度极低，因此，先配制成母液的母液。建议浓度如下表:
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药品名称
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配制的终浓度
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配制50ml的总质量（g）
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烟酸
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0.01g/ml
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0.5
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VB6
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0.1g/ml
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5
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甘氨酸
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0.2g/ml
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10
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NaMoO4.2H2O
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0.05g/ml
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2.5
|
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CuSO4.5H2O
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0.05g/ml
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2.5
|
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KI
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0.1g/ml
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5
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H3BO3
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0.062g/ml
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3.1
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MnSO4. H2O
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0.169g/ml
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8.45
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ZnSO4. 7H2O
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0.172g/ml
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8.6
|
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CoCl.6H2O
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0.05g/ml
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2.5
|
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VB1
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0.1g/ml
|
5
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母液的母液的配制过程:
（1）根据表中的浓度，称取50ml体积的药品的质量。
（2）加入到相应的溶液中，定容至50ml。
（3） 放入密封50ml塑胶管中，-20℃保存。
2 MS培养��母液浓度表：
（1）MS-A（macro）：为工作液浓度的50倍
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NH4NO3
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41.25g/500ml
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KNO3
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47.5g/500ml
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MgSO4·7H2O
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9.25g/500ml
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KH2PO4
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9.25g/500ml
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（2）MS-B（micro）：为工作液浓度的100倍
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H3BO3
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0.124g/200ml
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MnSO4·4H2O
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0.338g/200ml
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ZnSO4·7H2O
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0.172g/200ml
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CuSO4·5H2O
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0.0005g/200ml
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CoCl2·6H2O
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0.0005g/200ml
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KI
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0.0166g/200ml
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Na2MoO4·2H2O
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0.005g/200ml
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（3） MS-C：为工作液浓度的100倍
（4） MS-D：为工作液浓度的100倍
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烟酸
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0.01g/200ml
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VB6
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0.01g/200ml
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VB1
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0.002g/200ml
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甘氨酸
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0.04g/200ml
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（5）MS-E：为工作液浓度的100倍
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Na2-EDTA
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3.725g/500m
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FeSO4·7H2O
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2.875g/500m
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3 母液的配制
MS-A：称取NH4NO3 41.25g、KNO3 47.5g、MgSO4·7H2O 9.25g、KH2PO4 9.25g, 蒸馏水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
MS-B：吸取母液的母液如下，蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存。
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母液的母液量
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母液终浓度
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H3BO3
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0.124g/200ml
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MnSO4·4H2O
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0.338g/200ml
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ZnSO4·7H2O
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0.172g/200ml
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CuSO4·5H2O
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|
0.0005g/200ml
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CoCl2·6H2O
|
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0.0005g/200ml
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|
KI
|
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0.0166g/200ml
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Na2MoO4·2H2O
|
|
0.005g/200ml
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MS-C：称取CaCl2·2H2O 22.0g蒸馏水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中保存。
MS-D：吸取母液的母液如下，蒸馏水定容至200ml。4℃的冰箱中保存.
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母液的母液量
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母液终浓度
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烟酸
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0.01g/200ml
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|
VB6
|
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0.01g/200ml
|
|
VB1
|
|
0.002g/200ml
|
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甘氨酸
|
|
0.04g/200ml
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MS-E：称取Na2-EDTA 3.725g 、FeSO4·7H2O 2.875g蒸馏水溶解，容量瓶定容至500ml。4℃的冰箱中避光保存。
4 MS培养基基本工作液的配制
MS培养基基本工作液质量表
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组成成分
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数量(mg/l)
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组成成分
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数量(mg/l)
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NH4NO3
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1650
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Na2-EDTA
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37.3
|
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KNO3
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1900
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FeSO4·7H2O
|
27.8
|
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CaCl2·2H2O
|
440
|
CuSO4·5H2O
|
0.025
|
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MgSO4·7H2O
|
370
|
蔗糖
|
30
|
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KH2PO4
|
170
|
肌醇
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100.0
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KI
|
0.83
|
烟酸
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0.5
|
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H3BO3
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6.2
|
盐酸吡哆醇
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0.5
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MnSO4·4H2O
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22.3
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甘氨酸
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2.0
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ZnSO4·7H2O
|
8.6
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盐酸硫铵等
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0.4
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Na2MoO4·2H2O
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0.25
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CoCl2·6H2O
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0.025
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pH
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5.8
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（1）配制1升工作液，烧杯中放入700ml左右的蒸馏水，按顺序分别吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。
（2）加入固体蔗糖30g（根据具体实验调节浓度），溶解。
（3） 加入所需的**。定容至1000ml。
（4）0.1－1mol/l的HCl或NaOH调整pH值。
（5）如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂。琼脂浓度为10%～15%。
（6） 液体培养基可选择高温高压**和过滤**2种方法。固体培养基采用高温高压**方法。倒入三角瓶等培养器皿中，封口**。
（7）工作液配制的注意事项:
由于培养基内有丰富的营养物质，极利**和**繁殖，造成污染，影响组培的成功，一般有高温高压**和过滤**两种方法。
高温高压**: 一般用**锅**，注意**锅不能装的过满，锅内保持1.1Kg/cm2的压力,温度120℃左右，大约15－20分钟即可。
过滤**: 一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等，不宜用高温高压法**，可用过滤**，可过滤**后再加入已高温高压**的培养基中，过滤**应在无菌室或超净工件台上进行，以避免污染培养基。
