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人I 型胶原 N 末端肽检测试剂盒之后我又用单抗包被,结果一样:阴性、空白值好高。
1.包被:将三种单抗混合,1:1000,1:2000,1:4000......1:128000稀释,做三个平行,4°过夜。
2.**天洗涤4次,每次3min,拍干。5%脱脂乳封闭,37°,2h。
3.洗涤4次,每次3min,拍干。加抗原(为纯化好的原核表达蛋白)稀释浓度为2微克/ml,同时设阴性对照(胎牛血清1:100稀释),人I 型胶原 N 末端肽检测试剂盒空白对照(PBS溶液)。37°,1h。
4.洗涤4次,每次3min,拍干。加酶标抗体(1:1000稀释),37°,1h。
5.洗涤4次,每次3min,拍干。加TMB显色,每孔100微升。37°,10min。
6.2M硫酸终止,
7.OD450读数。
人I 型胶原 N 末端肽检测试剂盒结果,阳性值2.5,阴性对照和空白值很高可达到1.5。之后我又用细胞上清包被,其他和上面一样,加酶标抗体(1:1000稀释),封闭用的是1%明胶和2%的BSA,2%的BSA封闭:阴性值1.8,阳性和空白值都在2.0以上。1%明胶封闭:阴性值1.0,阳性和空白值都在2.0以上。
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