人成骨肉瘤细胞
货号KL-018
简称 Saos-2
细胞数 1×106
规格 1ml/T25
价格 询价
人成骨肉瘤细胞注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物**台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要**后方能丢弃。
详细描述 Description
细胞介绍
该细胞是J. Fogh和G.Trempe分离和鉴定的众多人肿瘤细胞系中的一种。该病人曾经多种****,包括RTG. methotrexate, adriamycin vincristine, cytoxan 和 aramycin-C。该细胞在**抑制小鼠中不致瘤,但在半固体培养基中形成集落。
细胞特性
1)来源:骨肉瘤、骨
2)形态:上皮细胞样
3)含量:>1x106 个/mL
4)污染:支原体、**、酵母和**检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
收到细胞后3天内如果发现污染,请及时拍照与我们联系。
细胞用途:仅供科研使用。
人成骨肉瘤细胞
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备McCoy’s 5A培养基(McCoy's 5A Medium,GIBCO,货号:16600-082),85%;胎牛血清,15%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%FBS,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。**天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:人成骨肉瘤细胞如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:人成骨肉瘤细胞待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为类;
1,细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2,4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和DMSO,轻轻混匀,DMSO终浓度为10%,细胞密度不低于1x10E6/ml,每支冻存管冻存1ml细胞悬液,注意冻存管做好标识。
3,将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。