单克隆抗体制备

单克隆抗体制备是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。

杂交瘤技术制备单克隆抗是针对体的主要步骤包括：

(1)抗原制备;

(2)**动物;

(3)**脾细胞和骨髓瘤细胞的制备;

(4)细胞融合;

(5)杂交瘤细胞的选择培养;

(6)杂交瘤细胞的筛选;

(7)杂交瘤细胞的克隆化;

(8)单克隆抗体的检定;

(9)分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立;

(10)单克隆抗体的大量制备。

下面简要介绍单克隆抗体制备过程：

1、**动物 **动物是用目的抗原**小鼠，使小鼠产生致敏B**细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的**方案进行**注射。 抗原通过血液循环或**循环进入外周**器官，刺激相应B**细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B**细胞。

2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种**细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，单克隆抗体制备一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的**细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，单克隆抗体制备只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的**学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过**鉴定其所分泌单克隆抗体的**球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。

猪末端补体复合体C5b-9(C5b-9)ELISA试剂盒 porcine Terminal Complement Complex C5b-9 (C5b-9) ELISA Kit 0.781-50ng/mL 0.32ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪**球蛋白G(IgG)ELISA试剂盒 porcine Immunoglobulin G (IgG) ELISA Kit 1.23-100ug/mL 0.53ug/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪**球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒 porcine Immunoglobulin E (IgE) ELISA Kit 0.156-10ng/mL 0.066ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪**球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒 porcine Immunoglobulin A (IgA) ELISA Kit 31.25-2000pg/mL 13.2pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪类胰蛋白酶(TPS)ELISA试剂盒 porcine Tryptase (TPS) ELISA Kit 0.313-20ng/mL 0.123ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪颗粒酶M(GZMM)ELISA试剂盒 porcine Granzyme M (GZMM) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 8.9 pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、单克隆抗体制备简便性、**性及经济性**评价。
猪抗神经节苷脂M1抗体(Anti-GM1)ELISA试剂盒 porcine Anti-Ganglioside M1 Antibody (Anti-GM1) ELISA Kit 3.125-200 U/L 1.3 U/L 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪抗缪勒管**(AMH)ELISA试剂盒 porcine Anti-Mullerian Hormone (AMH) ELISA Kit 0.156-10 ng/mL 0.041 ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP3β)ELISA试剂盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta (MIP3b) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 7.4 pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP3α)ELISA试剂盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha (MIP3a) ELISA Kit 15.625-1000 pg/mL 4.9 pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)ELISA试剂盒 porcine Macrophage Inflammatory Protein 1 Beta (MIP1b) ELISA Kit 31.25-2000 pg/mL 12.7 pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒 porcine Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) ELISA Kit 62.5-4000pg/mL 22.4pg/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪结合珠蛋白(Hpt)ELISA试剂盒 porcine Haptoglobin (Hpt) ELISA Kit 78.125-5000ng/mL 25.5ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。
猪结缔组织生长因子(CTGF)ELISA试剂盒 porcine Connective Tissue Growth Factor (CTGF) ELISA Kit 0.625-40ng/mL 0.242ng/mL 试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、**性及经济性**评价。