细胞传代方法您做对了吗？

细胞传代方法您做对了吗？

细胞与试剂方面：

1、细胞(单层细胞，镜检适合)

2、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)

3、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1 万单位）

4、7.5％NaHC03 溶液

5、0.25％胰蛋白酶

6、 PBS 洗液。

实验小用具方面：

1、小方瓶(100m1)

2、克氏瓶

3、胶塞

4、吸管(10ml、1m1）

5、细胞吹打管（20 ml）(以上用具需经121℃至少15 分钟高压**)

6、C02 孵箱

7、超净台

8、倒置显微镜

9、4℃、- 20℃冰箱

细胞传代的操作步骤

1、挑选细胞：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。

2、配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内，加入灭活小牛血清10m1，庆大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氢钠溶液3ml。（仅供一般参考）。

3、消化细胞：先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液完全覆盖细胞表面。

4、至细胞完全脱落到胰酶中：每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。

5、加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4 天成片(由细胞接种浓度决定)。

6、填写传代记录。