用于检测试剂盒不知道抗原的双抗体夹心法
ELISAS试剂盒用于检测不知道抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗刷缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗刷,下同)。
2. 加样:加必定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗刷。(一同做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,参与新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗刷。
4. 加底物液显色:ELISAS试剂盒于各反应孔中参与暂时制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 停止反应:于各反应孔中参与2M硫酸0.05ml。
6. ELISAS试剂盒效果断定:可于白色布景上,直接用肉眼查询效果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号标明。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规矩的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。