生物样品储存方法之冻干保存
冻干,也称为冷冻干燥。冻干可以保证大分子的稳定性。冻干是一种通用的方法,可用于存储大分子,如蛋白质,脂质和DNA;微生物如**和酵母等,如果经验足够丰富,哺乳动物细胞也可以冻干保存。下面简要介绍下冻干过程。
为了冻干液体样品,首先-80℃下冷冻过夜。体积越小,此过程越快,但注意样品体积应不大于容器容量的35%(例如,对于50ml管,*大样本量为17.5ml)。可以将样品倾斜成一个角度,以增加表面积。
一旦样品冷冻,将其置于冰上并迅速覆盖封口膜,记得在封口膜上戳一些孔。将管放入冷冻瓶中,并将其装载到冻干机上。这听起来很明显,但确保你知道如何运行机器。特别是关闭真空,收集样品时,如果处理不当,样品可能被吸出来。要检查样品是否完全冻干,可以取出试管并轻轻摇动。如果有残留的冰存在,会听到叮当声。在这种情况下,样品融化之前,需要将样品重新放回机器上。
上述过程适用于可装配在1.5-50ml管中的样品。如果你有一个更大的样品,你可能需要使用壳形冷冻(Shell freezing)。壳形冷冻包括以一定角度旋转含有样品的烧瓶,同时将其部分浸没在与干冰混合的甲醇或液氮中。当烧瓶旋转时,内容物扩散到烧瓶的表面上,增加表面积并逐层冻结。增加表面积增加了冷冻干燥的速度。可能还需要使用冷冻保护剂,但这又取决于样品类型了。
Shell freezing的具体内容见下图:
图片来自:SP Scientific
-
如果产品在“静态”条件下在烧瓶中冷冻,暴露于低压的表面积*小化,并且冷冻干燥持续时间延长
2. 当在其轴上冻结时,相同的体积,却具有暴露于低压的大得多的表面积,并且增强了冻干速率
3. 较大体积的产品可以通过升高烧瓶高度,旋转冻干。
4. 较小体积的产品,烧瓶可以直接围绕瓶轴自转。