ELISA试验的标准曲线和测定的重复性差，这是什么原因造成的？
其实，这个问题我们经常遇到，试验的标准曲线和测定的重复性差，这是典型的由测定操作引起的问题，常见原因如下：
a)可能原因：加样本及试剂量不准；孔间不一致；
解决方法：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密。
重复某一样品时，加样时间尽可能与**次接近；
重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；
样品稀释前应充分混匀。
b)可能原因：加样过快，孔间发生污染；
解决方法：重复测定标本，操作条件、人员等应尽可能与上次保持一致，以排除这些因素造成的不一致的可能性；加样不要过快。
c)可能原因：加错样本；
解决方法：检查记录和试剂，是否加错样本。
d)可能原因：加样本及试剂时，加在孔壁上部非包被区；
解决方法：加样枪头不要贴壁。
e)可能原因：不同批号试剂盒中组分混用；
解决方法：不同批号试剂盒中组分不可混用。
f)可能原因：温育时间、洗板、显色时间不一致；
解决方法：检查时间是否一致。
g)可能原因：孔内污染杂物；
解决方法：离心样品，排除杂物。
h)可能原因：试剂/样品没有混匀；
解决方法：充分混匀样品和试剂。
i)可能原因：血清标本未完全凝固即加入，反应孔内出现纤维蛋白凝固或残留血
细胞，易出现假阳性反应等。
解决方法：待血清标本完全凝固后做试验。
在实验室，对试剂准备一般不太注意，通常的做法是，在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用，而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题，其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。
因此，在ELISA测定中试剂的准备*为关键的是，在实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20min以上后，再进行测定，以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的，主要是为了在后面的温育反应步骤中，能使反应微孔内的温度较快地达到所要求的高度，以满足测定要求。其次，目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制，因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。
此外，当试剂盒以OPD为底物时，则底物溶液应在反应显色前临时配制。
