斑马鱼皮肤损伤模型的建立及分子机制
陈锡强 王荣春 王希敏 刘可春 萧崇德 韩利文 侯海荣
齐鲁工业大学(山东省科学院)山东省科学院生物研究所山东省科学院**筛选技术重点实验室山东省生物检测技术工程实验室山东省生物传感器重点实验室中原大学生物科技系表皮干细胞研究室
摘要：目的以皮肤荧光转基因斑马鱼（ktr4:NTR-h Kik GR）为实验动物,研究长春新碱对皮肤细胞的损伤作用及其分子机制,建立皮肤损伤模型。方法取受精后24 h皮肤荧光斑马鱼胚胎,将脱膜后的胚胎分别置于0.010.04 mmol·L-1不同浓度的长春新碱中,24 h后采用荧光显像的方法对斑马鱼皮肤荧光斑点进行计数和统计处理;同时对鱼体细胞死亡情况进行TUNEL试剂盒检测,确定其皮肤细胞死亡的水平;利用蛋白**印迹的方法对各组斑马鱼胚胎的caspase-3、KRT4及p53表达水平进行检测。结果在长春新碱与斑马鱼胚胎共同孵育24 h后,0.02、0.04 mmol·L-1长春新碱明显引起斑马鱼荧光皮肤细胞减少（P<0.01）;TUNEL检测表明,长春新碱与对照组比较能明显引起斑马鱼皮肤细胞凋亡;Western bolt分析显示,0.02、0.04 mmol·L-1长春新碱能诱导斑马鱼胚胎caspase-3和p53表达增加（P<0.01）,同时高浓度的长春新碱可使皮肤角蛋白KRT4表达明显减少（P<0.01）。结论利用长春新碱引起斑马鱼皮肤损伤,该局部毒性作用可作为皮肤损伤的造模新方法。 还原
基金：国家自然科学基金资助项目(No 81202584)； 山东省重点科技计划项目(No 2016GSF121005)；
关键词：长春新碱; 斑马鱼; 细胞凋亡; caspase-3; p53; KRT4;
分类号：R-332;R96
