抗体,也叫**球蛋白 (Ig),是一种能特异性结合抗原的糖蛋白,而抗原是在易感染动物体内引发抗体产生的物质。在体内,抗体是由于外 源性分子的侵袭而产生的。抗体以一个或者多个 Y 字形单体存在,每个 Y 字形单体由 4 条多肽链组成,包含两条相同的重链和两条相同的轻 链。轻链和重链是根据它们的分子量大小来命名的。Y 字形结构的顶端是可变区,为抗原结合部位。
任何一个抗体的轻链都可以分为κ或λ型(基于小分子多肽结构上的差异),每一个抗体的重链则决定了它的类或型。
抗体结构
重链
哺乳动物 Ig 的重链一共有五种,分别用希腊字母α、δ、ε、γ和 μ 来命名,相对应组成的抗体就称为 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM 五种抗 体。不同的重链在大小和组成上有所区别,α和γ包含大约 450 个氨基酸,而 μ 和ε则有大约 550 个氨基酸。
每个重链有两个区:恒定区和可变区。所有同一型的抗体其恒定区都是相同的,不同型的抗体之间则存在差异。重链γ、α和δ的恒定区的 组成为 3 个前后串联的 Ig 结构域,并有一个铰链区增加它的灵活性;重链 μ 和ε的恒定区则由 4 个 Ig 结构域组成。不同 B 细胞产生的抗体 其重链的可变区不同,但同一种 B 细胞或细胞克隆产生的抗体其可变区则是相同的,每一个重链的可变区都是大约 110 个氨基酸长度,并组 成一个单独的 Ig 结构域。
轻链
哺乳动物只有两种轻链:λ型和κ型,每条轻链有两个前后相连的结构域:一个恒定区和一个可变区。轻链的长度大约为 211~217 个氨基酸, 每个抗体包含的两条轻链总是相同的,对哺乳动物来说每一个抗体中的轻链只有一个型:κ或λ型。在一些低等的脊椎动物中,像软骨鱼类 (软骨鱼)和硬骨鱼类体内也会发现其他型的轻链如ι(iota) 型。
Fab和Fc段
Fc 段可以直接结合酶或荧光染料来标记抗体,是在 ELISA 过程中抗体铆钉在板上的部位,也是在**沉淀、**印迹和**组化中识别并结 合二抗的部位。抗体可以被蛋白水解酶如木瓜蛋白酶水解成 2 个 F(ab) 段和一个 Fc 段,或者被胃蛋白酶从铰链区断开,水解成一个 F(ab)2 段 和一个 Fc 段。IgG 抗体片段有时是非常有用的,由于缺少 Fc 段,F(ab) 段即不会和抗原发生沉淀,也不会在活体研究中被**细胞捕获。因 为分子片段较小,且缺乏交联功能(由于 Fc 段的缺失),Fab 段通常用于功能性研究中的放射性标记,Fc 段则主要用做组化染色中的阻断剂。
抗体同型:
根据Y形结构的数量和重链种类的不同,哺乳动物体内的抗体可以分为 5 类:IgG、IgM、IgA、IgD、IgE,它们的重链分别是γ、μ、α、 δ、ε。各类抗体在生物学特性、功能区域以及结合不同抗原的能力上有所不同,如下表所列:
鸡的 IgY 在生产多克隆抗体时,选择鸡会比兔和羊有更大优势。
1. 鸡不是哺乳动物,因此更易产生针对哺乳动物抗原的高亲和性抗体(特别是高度保守的哺乳动物蛋白)。
2. 众所周知,这是产生多克隆抗体的*合乎伦理的途径,不需鸡血,只要简单收集鸡蛋就可以。我们的母鸡是以六只一组喂养,而我们有独
特的辨认鸡蛋系统,使鸡能自由走动。
3. 一只鸡就可以产生大量抗体,每个月大约可达 3 克 IgY,是兔子的 10-20 倍,而且与兔子相比,鸡产生抗体的周期更快,早在第 25 天就 可以从鸡蛋中获取高滴度的抗体。
4. 由于 IgY 存在于鸡蛋中,而鸡蛋可以收集起来并长期储存,还可以根据不同批次抗体的滴毒和/或亲和力来追溯性的从鸡蛋中纯化我们想要 的 IgY。
5. 喂养和修建鸡舍的费用低于兔子。
6. IgY 是一种很稳定的抗体,具有以下和哺乳动物 IgG 相同的特征:
• 二价
• 可被木瓜蛋白酶降解成二价 Fab 片段
• 通过标准程序可以进行酶标记、生物素标记和金标记
7. IgY 的 Fc 片段与哺乳动物的 IgG 有明显的不同
• 不会结合哺乳动物的类风湿因子或其它自然产生的抗哺乳动物抗体的抗体(如 HAMA),从而降低实验背景
• 不会激活哺乳动物的补体系统
• 不会结合哺乳动物的 Fc 受体
• 不会结合金葡菌蛋白 A 或蛋白 G
