质粒DNA提取遇到的难题
从来没有遇到过质粒提不出来的情况，不过既然出现这种情况，就要想办法解决啊！常规来说有两个方面需要注意。一是摇菌的问题。二是提取的问题。不过从你的描述，我觉得你主要在摇菌上有问题，提取过程你都非常注意了，不过纯度不是很好，还需要改进，注意蛋白的污染。关于摇菌，需要注意以下几点。**，就是原始菌，是不是含质粒菌，有没有被污染，有没有死亡，如果你的原始菌没有质粒或者很少很少，那么你怎么提也是提不出来的。**，就是***是否加的正确，浓度是多大，有没有失效等，需要一定的浓度，如果浓度不够，质粒菌就会越来越少，知道*后被杂菌给取代了，当然也是提不出质粒来。第三，摇菌的时间，要合适，不能长也不能短，一般过夜，大约12-16小时为*好，可以适当延长到18小时，时间太长，超过对数生长期，**的死亡就会增多，导致质粒提取的效率下降。第四，摇菌的温度是不是合适，用温度计测测摇床的温度，有时这点容易被忽视。好像就这些了，考虑一下是不是有这些问题。
