细胞系传代

细胞系传代

1.当细胞铺满整个平皿(100mm)后,吸弃旧培养液，10mLPBS洗一遍
2.0.25%胰酶（预热20分钟左右）2ml消化，轻轻摇晃，直至肉眼见单层细胞呈块状脱落（或在显微镜下观察细胞之间分离），立刻加5ml(DMEM+10%FBS)终止消化，轻柔吹打8-10次成单细胞。
3.离心1000rpm*5min,弃上清，加DMEM+10%FBS轻柔吹打。
4.将细胞悬液1:4传到100mm细胞培养皿中，每个皿加10ml(DMEM+10%FBS)培养液，正常情况下2-3天就可以长满，期间不用换液。
因为我们用饲养层细胞铺皿而不是明胶包被，所以细胞系传代之前必须处理饲养层细胞。
1.饲养层细胞STO处理：当STO铺满平皿后，向培养液中加入100ul 1mg/mlmitomycinC(toxic, 操作时不要接触，作用是抑制STO增殖)，轻轻摇晃平皿，保证丝裂霉素分布均匀，放置于培养箱中处理2h后，吸弃培养液，10mlPBS洗两遍（目的是把mitomycinC洗净），0.25%胰酶消化，5ml(DMEM+10%FBS)终止，离心1000rpm*5min弃上清，加DMEM+10%FBS后吹打均匀，种到新的100mm细胞培养皿，补齐培养液至10ml。置于培养箱中过夜。
2.**天早上传干细胞：
（1）细胞系传代吸弃旧培养液，10mlPBS洗一遍，2ml 0.25%胰酶消化，边消化边轻轻晃动培养皿，4-5min后镜下观察发现发部分细胞脱落，成小的细胞团块，加8ml DMEM+10%FBS终止消化，轻柔吹打。
（2）然后将液体转移到15ml塑料离心管中，静置10-15min，吸弃上清，加2mlES培养液。
（3）将滴管在酒精灯下拉成非常细的玻璃管，吹打1－2次，尽量将ES吹散
（4）将前**铺好的STO的培养液吸弃，换成10ml的ES培养液（操作要小心，不然STO很容易脱落），再把塑料离心管中的ES1:3或1:4(视情况而定)传到铺好的STO皿中，前后左右垂直晃动几下，使干细胞分布均匀，置于培养箱中，每天换液，两到三天传代。
细胞系传代应该注意的问题：
1.STO不管是在ES传代还是换液过程中都可能因为加液体速度过快而脱落，所以*好靠近培养皿壁先一滴一滴加，避免液体直接打在STO上。
2.玻璃管拉得尽量细一些。
3.一定要把mitomycin洗干净
 我养过很多细胞，肿瘤细胞和正常细胞都有，总的感觉是肿瘤细胞要比正常细胞好养。先介绍一下目前手头正在养的两株细胞。
SNU-398:人肝癌细胞，培养液是1640+10mmol/LHEPES+1mmol/L丙酮酸钠+1.5g/L碳酸氢钠+10％FBS
PLC/PRF/5：人肝癌细胞，培养液是EMEM+0.1mmol/L非必需氨基酸+1mmol/L丙酮酸钠+1.5g/L碳酸氢钠+10％FBS
消化液是0.25％胰酶+0.03％EDTA
两株细胞都是贴壁细胞，SNU－398消化时需先加入1ml（25cm2）消化液，使消化液均匀覆盖瓶底后倒掉，然后再加入1ml消化液，室温放置3分钟左右，加入培养液8ml中止消化，吹打使细胞分散（动作要轻，避免气泡），再分别将细胞液各3ml加入另外两个新瓶子，添加培养液至8ml/瓶，继续培养
PLC/PRF/5消化时只需加入1ml（25cm2）消化液，细胞系传代使消化液均匀覆盖瓶底后静置5分钟左右，轻拍培养瓶几下，然后加入培养液，一般也是一传三，操作同SNU-398。

HZ-3/DDP 卵巢癌顺铂耐药株
HZco-2 结肠癌细胞
HZLa 宫颈癌细胞
HZLo205 结肠癌细胞
HZlaS3 宫颈癌细胞
HZ320DM 结肠癌细胞
HZC-1B **内膜癌细胞
HZCT-8 回盲肠腺癌细胞
HZEG-3 绒癌细胞
HZCT-116 低分化结肠腺癌细胞
HZU-145 前列腺癌细胞
HZT-29 结肠腺癌细胞
HZNCa 前列腺癌细胞
HZovo 结肠癌细胞
HZone 前列腺癌细胞
HZ480 结肠癌细胞
HZC-3 前列腺癌细胞
HZ-7402 肝细胞癌细胞
HZsu-Pr1 非雄**依赖型前列腺癌
HZC-9204 肝癌细胞
HZOS 骨肉瘤细胞
HZ3B 肝癌细胞
HZG-63 成骨肉瘤细胞
HZG2 肝癌细胞
HZos-2 骨肉瘤细胞
HZ-7721 肝癌细胞
HZ-2 OS 骨肉瘤细胞
HZAN-1 胰腺导管上皮癌细胞
HZS-732 骨肉瘤细胞（瘤株）
HZ1005 胰腺腺癌细胞
HZ-204 横纹肌肉瘤细胞
HZW1990 胰腺腺癌细胞
HZ1080 纤维肉瘤细胞