产品描述
Stbl2是采用大肠杆菌JM109菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,适合于多种插入片段的化学转化。具有以下特点:
① 更适于不稳定插入片段(正向重复序列,逆转录病毒序列等)的克隆;
② 更适于克隆慢病毒载体、甲基化的基因组序列;
③ 利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取;
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化学感受态细胞④ 不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。
本品使用pUC19质粒检测,转化效率可达109cfu/μg。
本品基因型:F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 。
运输与保存方法
Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化学感受态细胞干冰运输。
Stbl2 感受态细胞-80℃保存,pUC19质粒-20℃保存。有效期半年。
注意事项
1)感受态细胞应保存在-80℃,不可反复冻融和放置时间过长,以免降低感受态细胞的转化效率。
2)整个转化操作,严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3)为确保*高转化效率,整个操作过程应尽量轻柔,并保持低温。
4)为防止转化不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,*低化实验可能遇到的风险。Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化学感受态细胞
使用方法
1)取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
【注】:一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用,应注意所用的DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。
2)向100 μl感受态细胞悬液中加入目的DNA,轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置25min。
3)置于42℃水浴中热激45 s,然后快速将管转移到冰浴中,冷却2-3min,该过程不要摇动离心管,否则会降低转化效率。
4)向离心管中加入900μl无菌的SOC或LB培养基(不含***),混匀后置于30℃摇床振荡培养90min(225rpm),目的是促使菌体复苏。
【注】:当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率,若转化Control pUC19 计算转化效率,则需37℃,225 rpm复苏60min。
5)将上述复苏的菌液于5000rpm离心1min,留取100μl左右上清轻轻混匀菌液并涂布到含相应***的SOC培养基上。
6)将平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。
【注】:若转化control pUC19 计算转化效率,则需37℃培养过夜。Stbl2 Chemically Competent Cell Stbl2 化学感受态细胞