Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒

Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒

产品描述

  全血直接PCR试剂盒（Blood direct PCR Kit）可以直接对全血样本进行PCR，无需进行DNA纯化或样品预处理，大大降低了污染风险，缩短时间和节约支出。
试剂盒中包含2 × Blood Master Mix，其中的血液DNA聚合酶专为全血DNA直接扩增而设计，对全血样品中的PCR抑制剂具有超强的抵抗力，可扩增全血浓度高达40%。高度优化的反应体系使得Blood direct PCR Kit能够从全血样品中高效扩增长达7.5 kb的基因组片段。扩增产物为平端，适用于HieffCloneTM快速克隆试剂盒 (11001ES25/ 11002ES10)。另外，试剂盒中配有与哺乳动物和其他许多脊椎动物兼容的引物预混液Positive control primer mix，可用于进行阳性对照反应。Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒
该试剂盒可用于直接扩增的血样类型包括：新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血渍，且兼容所有常规抗凝剂 (EDTA、柠檬酸盐、肝素等)。Blood Direct PCR Kit已经在许多哺乳动物物种上进行了成功测试，并成功扩增了几种禽类全血。
Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒

运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。产品-20 ºC保存。
质量控制
50 μl PCR体系中，以5 μl人全血为模板扩增7.5 kb片段。35个循环后将1/10 PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的7.5 kb条带。
注意事项
1) 推荐血液模板使用量为反应总体积的1/10，即50 μl的反应体系内加入5 μl全血。如全血使用体积超过反应总体积的1/10，可能需要进一步调整Mg2+浓度。
2) 吸取抗凝血，尤其是长期存放过的抗凝血时，应尽量避免吸取血液凝块。Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒
3) 延伸时间按30 sec/kb设定，请勿使用更长的延伸时间。
4) PCR完成后，推荐将反应液于1,000 × g (大约4,000 rpm) 离心1～3 min以沉淀血细胞碎片，之后取上清进行下游分析。

全血扩增引物设计注意事项
1) 引物3’端*后一个碱基选择C或G；
2) 引物3’端*后8个碱基应避免出现连续错配；
3) 引物3’端尽量避免出现发夹结构；
4) 引物Tm值控制在60℃-72℃之间 (推荐使用软件Primer Premier 5进行计算)；
5) 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6) 引物GC含量控制在40%-60%之间；
7) 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR试剂盒 操作方法

1. 反应体系配制：

所有组分解冻后请充分摇匀，使用完毕后及时放回-20℃。