![pNLF1-secN [CMV Hygro]载体图谱](http://www.biofeng.com/uploads/%E8%BD%BD%E4%BD%93%E5%9B%BE%E8%B0%B1/pNLF1-secN%20[CMV%20Hygro]%20vector%20map.jpeg)
pNLF1-secN [CMV/Hygro] Vector sequence reference points:
Base pairs 6005
CMV immediate early enhancer/promoter 1–742
Chimeric intron 857–989
T7 RNA polymerase promoter 1033–1052
secNanoLuc® protein coding region 1067–1663
Linker 1664–1675
Multiple cloning region 1676–1751
SV40 late poly(A) region 1814–2035
SV40 early enhancer/promoter 2134–2546
Synthetic hygromycin (Hygr) coding region 2577–3614
Synthetic poly(A) signal 3638–3686
β-lactamase (Ampr) coding region 3947–4807
ColE1-derived plasmid replication origin 4962–4998
NanoLuc萤光素酶融合表达载体pNLF1-secN
更小(19.1kDa)、更亮(比萤火虫和海肾萤光素酶亮度高 100 倍)的 NanoLuc萤光素酶(Nluc)非常适用于蛋白融合应用。NanoLuc 融合蛋白应用广泛:作为蛋白稳定性报告基因、生物发光法细胞成像(BLI)探针或作为供体信号用于生物发光共振能量转移(BRET)研究蛋白: 蛋白或蛋白: 小分子相互作用研究。
NanoLuc 蛋白融合载体可方便的 N- 或 C-端融合 Nluc 和您感兴趣蛋白的融合蛋白;有两类形式载体可供选择:
pNLF 载体系列:产生 N- 或 C- 端融合全长 Nluc 的融合蛋白或应用传统的克隆方法(多克隆位点)将分泌型 Nluc 克隆到感兴趣的蛋白 N 端。
pF 载体系列:使用 Flexi Vector Cloning System 产生 N- 端或 C- 端融合蛋白;Flexi Vector Cloning System 是一种直接克隆方法,基于两种稀有酶切位点 SgfI 和 PmeI,可以在 Flexi 载体之间转换蛋白编码序列,快速、高效和高保真。
特点 - 优点
轻松定量蛋白丰度变化:使用 Nano-Glo Luciferase Assay System 进行单一试剂加样,来定量 NanoLuc 融合蛋白的信号,进而检测细胞内蛋白水平。
生物相关性更高:NanoLuc 报告基因光信号更强,内源性表达水平的 NanoLuc 融合蛋白即可被检测到,可避免过度表达造成的假象。
使蛋白的细胞内动态变化可视化:NanoLuc 报告基因光信号更强,缩短了成像曝光时间,无需反复激发样本,从而降低了激发造成的细胞毒性反应。
改进 BRET 研究技术:NanoLuc 拥有更强的光信号,蓝移的发射光谱,因而与荧光受体的光谱交叉更少,信噪比更佳,动态范围更宽。
灵活的克隆选择:可使用传统克隆方法或 Flexi 克隆系统轻松将 NanoLuc 与目标蛋白的 C 端或 N 端融合。
可实现从瞬时转染到稳定转染的轻松过渡:所有载体都含有用于建立稳定细胞��的哺乳动物筛选标志物。
应用
化合物筛选
蛋白: 蛋白相互作用
蛋白: 小分子相互作用
生物发光成像
蛋白稳定性研究