pOptiVEC-TOPO载体描述： OptiCHO Express 试剂盒设计用于悬浮培养物中二氢叶酸还原酶缺陷型 (DHFR-) 中国仓鼠卵巢 (CHO) DG44 细胞的高效生长和转染。 该试剂盒为在无血清环境中高效转染 DHFR- DG44 细胞以及随后开发稳定的细胞系提供完整的实验流程以及所需的试剂，包括：
pOptiVEC-TOPO 载体 - 双顺反子克隆载体，包含在 CHO-DG44 细胞中开发稳定细胞系所需的 DHFR 基因（图 1）；载体与 TOPO 兼容，能够以 >85% 的效率克隆包含目的基因的 PCR 产物
FreeStyle MAX 转染试剂 - 无动物来源成分的转染试剂，可提供较高的转染效率和一致的结果
CD OptiCHO 培养基 - 化学成分确定的无蛋白质培养基（不含次黄嘌呤或胸苷），设计用于重组 CHO-DG44 细胞的高密度悬浮培养和分泌蛋白的生产
CD DG44 培养基 - 化学成分确定的无蛋白质培养基，添加次黄嘌呤和胸苷，支持 DG44 细胞在悬浮培养中的*优生长DG44 细胞 - 针对 CD DG44 培养基预先进行过驯化，并经过筛选以进行高效的细胞生长和转染
此外，OptiCHO Express 试剂盒提供 GIBCO OptiPRO SFM 以促进 DNA-脂质体复合物的形成，提供 L-谷氨酰胺（单独提供，以增加培养基的稳定性）和 Pluronic F-68 以控制悬浮培养物中的剪切力。
储存条件：
在 15°C 至 30°C 储存 Pluronic F-68。在 2°C 至 8°C 避光储存 OptiPRO SFM、CD OptiCHO 培养基和 FreeStyle MAX 转染试剂。 在 -5°C 至 -20°C 储存 L-谷氨酰胺、pOptiVEC-TOPO 载体、CMV 正向测序引物和 EMCV IRES 反向测序引物。在 -80°C 储存 One Shot TOP10 化学感受态大肠杆菌细胞。在液氮中储存 DG44 细胞。 pOptiVEC-TOPO载体含有以下元件： Human cytomegalovirus (CMV) immediate-early promoter/enhancer for high-level gene expression in a wide range of mammalian cells
TOPO Cloning site for rapid and efficient cloning of Taq-amplified PCR products
Internal Ribosome Entry Site (IRES) from the encephalomyocarditis virus (EMCV) for cap-independent translation of DHFR
Dihydrofolate reductase (DHFR) gene for auxotrophic selection of transfected DG44 cells and for genomic amplification of stable cell lines using methotrexate (MTX)
The Herpes Simplex Virus thymidine kinase polyadenylation signal for proper termination and processing of the recombinant transcript
pUC origin for high copy replication and maintenance of the plasmid in E. coli
Ampicillin (bla) resistance gene for selection in E. coli
