pPIC9K-His载体中存在卡那抗性基因,允许利用卡那抗性在酵母体内筛选多克隆拷贝,载体其余部分与pPIC9载体完全一样。pPIC9K-His载体能够使用的毕赤酵母宿主菌是KM71和GS115。
pPIC9K-His载体详细信息如下:
• pPIC9K-His载体大小9.3 bp,是融合表达载体, 含有C-His标签,表达出来的蛋白含有C端his标签,可以直接用于镍柱纯化。
• 载体构建过程中,可供使用的单一限制性内切酶位点为SnaB I, EcoR I, Avr II, Not I.
• 利用alpha因子分泌信号肽,分泌表达蛋白基因。
• 在载体构建过程中,你的基因必须保证与信号肽的起始密码子的读码框一致。
• 毕赤酵母中利用HIS4进行筛选。
• 为了将基因插入GS115或KM71的AOX区, 使用Sac I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+Mut+基因型,KM71中产生His+ MutS基因型)
•为了将基因插入GS115或KM71的His4区, 使用Sal I或者Stu I限制性内切酶线性化质粒(GS115中产生His+ Mut+基因型,KM71中产生His+ MutS基因型)
•将基因插入GS115的AOX1区域,需要使用Bgl II 线性化质粒 (产生His+MutS基因型)。