pAO815是一个鉴定多拷贝基因插入到毕赤酵母基因组中的载体。
1. pAO815载体大小为7709 bp。
2. 在多克隆位点区域,拥有1个单一的限制性酶切位点EcoR I。
3.胞内表达。
4.载体构建时,需要包含一个ATG启动子,同时需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)
5. 毕赤酵母中使用HIS4基因筛选。
6. 将基因插入GS115和KM71的HIS4中,需要使用Sal I或者Stu I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+,KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。
7. 将基因插入GS115的AOX1基因中,也可以使用Bgl II 限制酶线性化质粒,产生的酵母基因型为His+ MutS。