![pDC315载体图谱](http://www.biofeng.com/uploads/%E8%BD%BD%E4%BD%93%E5%9B%BE%E8%B0%B1/pDC315%E8%BD%BD%E4%BD%93%E5%9B%BE%E8%B0%B1.gif)
![pDC315多克隆位点](http://www.biofeng.com/uploads/%E8%BD%BD%E4%BD%93%E5%9B%BE%E8%B0%B1/pDC315%E5%A4%9A%E5%85%8B%E9%9A%86%E4%BD%8D%E7%82%B9.gif)
主要元件位置:
2~102: ITR
469~991: MCMV promoter (short)
1029~1188: SV40 polyA
1190~1223: loxP
1603~1903: ori
2353~3169: amp
3454~453: Ad element
3823~1: ITR
主要酶切位点:
Xba I:455
EcoR I:994
Nhe I:1005
BamH I:1013
Sal I:1024
Acc I:1025
pDC315 含有以下元件:
1. Ampr: 为质粒在E.coli(如DH5α)中扩增提供氨苄抗性(终浓度100μg/ml)。
2. ori:质粒在E.coli 中的复制起点。
3. Ad:Ad 序列,主要由Ad 可以与Ad 基因组质粒发生同源重组。
4. ITR:Ad 反向末端重复序列,是Ad 基因组的包装识别信号。
5. MCMV:来自小鼠CMV 病毒的启动子。
6. SV40 polyA:来自SV40 病毒T 抗原的mRNA 加尾信号。
7. loxP:真核重组酶(Cre)的重组识别序列。
通过pDC315 构建重组腺病毒的用户须知
1. 用户需向Microbix Biosystems, Inc.公司购买pDC315 质粒,并与Microbix Biosystems, Inc.公司签订MTA。
2. 为了确保病毒包装的目的基因能够正确表达,用户需对自己构建的带有目的基因的pDC315 进行酶切鉴定,并建议进行测序验证,保证克隆的基因正确。
3. 由于pDC315 本身是一种真核表达载体,转染细胞即可介导目的基因的表达,因此建议有条件的用户在完成质粒构建后,将其转染细胞,通过ELISA、**组化或Western 的方法来检测目的基因的表达,以及检测目的基因表达后的生理活性。这样可以进一步增加实验成功的把握。