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ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
ELISA方法的基本类型、用途及操作程序
1、直接ELISA试剂盒
本法首要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎(DVH)抗体的ELISA为例,直接ELISA的操作程序如下:
(1) 资料
① 包被液、洗刷液、保温液、底物液、停止液;
② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参阅血清;待检鸭血清;
③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。
(2) 方法过程
① 加抗原包被 → 4℃过夜,洗刷三次、抛干
② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗刷三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时,洗刷三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 30分钟,加停止液
⑤ 用ELISA检测仪测定OD值,并计算出P/N比值。
(3) 成果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,并且已知阳性血清的OD值≥0.4;在上述条件建立的情况下,如果待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,并且待检血清的OD值≥0.4,则判为阳性,不然判为阴性。
2、双抗体夹心ELISA试剂盒
本法首要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。
① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗刷三次、抛干
② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗刷三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗刷三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 15分钟,加停止液
⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。
3、双夹心ELISA试剂盒
此法与双抗体夹心ELISA的首要差异在于:它是采用酶标抗抗体查看多种大分子抗原,它不只不用符号每一种抗体,还可进步试验的敏感性。
此法的根本程序为:
① 加抗体(Ab-1)包被 → 4℃过夜,洗刷三次、抛干
② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗刷三次、抛干
③ 加用非同种动物出产的特异性抗体(Ab-2)→ 37℃ 60分钟,洗刷三次、抛干
④ 加入酶标抗Ab-2抗体(AB-3)→ 37℃ 60分钟,洗刷三次、抛干
⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加停止液
⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。