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ELISA中碰到的问题
日期：2024-07-23 13:59
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摘要：
ELISA中碰到的问题
今天做了ELISA，是测抗体的，做出来之后，阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了，而且测出来的OD值没有规律，有几个相同稀释倍数的孔和副孔OD值相差也大，分析了一下，觉得可能有几个问题。
1）要么是脱脂奶粉的封闭时间不够，我封闭了一个小时
2）用PBST洗板的时候，甩的方向不对，造成了孔之间的污染
3）二抗没洗涤干净，我用PBST洗涤了五次，每次间隔三分钟，要是再洗不干净我也不知道怎么做了
1."阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了"现象
...
ELISA中碰到的问题
今天做了ELISA，是测抗体的，做出来之后，阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了，而且测出来的OD值没有规律，有几个相同稀释倍数的孔和副孔OD值相差也大，分析了一下，觉得可能有几个问题。
1）要么是脱脂奶粉的封闭时间不够，我封闭了一个小时
2）用PBST洗板的时候，甩的方向不对，造成了孔之间的污染
3）二抗没洗涤干净，我用PBST洗涤了五次，每次间隔三分钟，要是再洗不干净我也不知道怎么做了
1."阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了"现象
原因：检测抗体的工作浓度是否过高？检测抗体与包被物是否发生交叉反应？
2.“相同稀释倍数的孔和副孔OD值相差也大”现象
原因：孔间的CV值是多少？操作人员的操作熟练程度？移液设备的**度如何？
封闭一般有很多种封闭液:2%-5%脱脂奶粉;10%-15%小牛血清;0.25%-1%明胶;1%BSA;1%-2%OVA;10-15%羊血清……。封闭的作用是将孔内为包被上抗原的位点封闭住，以防一抗/二抗发生非特异性吸附，从而干扰ELISA检测结果。封闭可以采取37度2小时，也可以4度过夜。封闭时可以采取满孔封闭，效果会更好。
此外，洗涤的时候需注意，洗涤液勿加的太多，以防止孔孔之间串孔；一抗二抗洗板时*好多洗几遍，5遍左右吧，间隔三分钟就差不多了。
