企业信息
第7年
- 入驻时间: 2015-11-06
- 联系人:顾磊
- 电话:021-60514606
-
联系时,请说明易展网看到的
- Email:shybio@126.com
产品分类
新闻详情
ELISA中碰到的问题
日期:2024-12-25 16:16
浏览次数:407
摘要:
ELISA中碰到的问题
今天做了ELISA,是测抗体的,做出来之后,阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了,而且测出来的OD值没有规律,有几个相同稀释倍数的孔和副孔OD值相差也大,分析了一下,觉得可能有几个问题。
1)要么是脱脂奶粉的封闭时间不够,我封闭了一个小时
2)用PBST洗板的时候,甩的方向不对,造成了孔之间的污染
3)二抗没洗涤干净,我用PBST洗涤了五次,每次间隔三分钟,要是再洗不干净我也不知道怎么做了
1."阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了"现象
...
ELISA中碰到的问题
今天做了ELISA,是测抗体的,做出来之后,阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了,而且测出来的OD值没有规律,有几个相同稀释倍数的孔和副孔OD值相差也大,分析了一下,觉得可能有几个问题。
1)要么是脱脂奶粉的封闭时间不够,我封闭了一个小时
2)用PBST洗板的时候,甩的方向不对,造成了孔之间的污染
3)二抗没洗涤干净,我用PBST洗涤了五次,每次间隔三分钟,要是再洗不干净我也不知道怎么做了
1."阴性孔的后几个孔和空白对照组也显色了"现象
原因:检测抗体的工作浓度是否过高?检测抗体与包被物是否发生交叉反应?
2.“相同稀释倍数的孔和副孔OD值相差也大”现象
原因:孔间的CV值是多少?操作人员的操作熟练程度?移液设备的**度如何?
封闭一般有很多种封闭液:2%-5%脱脂奶粉;10%-15%小牛血清;0.25%-1%明胶;1%BSA;1%-2%OVA;10-15%羊血清……。封闭的作用是将孔内为包被上抗原的位点封闭住,以防一抗/二抗发生非特异性吸附,从而干扰ELISA检测结果。封闭可以采取37度2小时,也可以4度过夜。封闭时可以采取满孔封闭,效果会更好。
此外,洗涤的时候需注意,洗涤液勿加的太多,以防止孔孔之间串孔;一抗二抗洗板时*好多洗几遍,5遍左右吧,间隔三分钟就差不多了。