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ELISA实验的标准操作方法
日期：2024-07-26 17:33
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摘要：
ELISA实验的标准操作方法
ELISA实验方法操作标准，用于ELISA测定的临床标本*为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、**、特种蛋白、细胞因子和****等。对用于**和****测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值出现：生长**、小鼠ELISA试剂盒促黄体**（LH）和促卵泡**（FSH）均以阵发性方式释放，...
ELISA实验的标准操作方法
ELISA实验方法操作标准，用于ELISA测定的临床标本*为常用的是血清（浆），有时因为特定的检测目的，也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、**、特种蛋白、细胞因子和****等。对用于**和****测定的血清标本的收集，要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4～6点之间，会有一峰值出现：生长**、小鼠ELISA试剂盒促黄体**（LH）和促卵泡**（FSH）均以阵发性方式释放，因此，在测定此类**时，有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。再如****的检测，应根据药代动力学选择服药后的*适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响，只是在处理和保存方面要考虑以下几个方面：
（1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白小鼠ELISA试剂盒浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。
（2）样本的采集及血清分离中要注意尽量避免**污染，一则**的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些**的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
（3）血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。
（4）冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。
（5）标本在保存中如出现**污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测。
