ELISA方法的建立中包被浓度的问题

ELISA方法的建立中包被浓度的问题

包被浓度一般通过方阵ELISA来确定。
经典的方阵ELISA是将抗原和抗体各自稀释成不同梯度浓度，结果将OD值P/N>2的均判为阳性，选取OD值在1.0左右的那个Ag-Ab浓度为*佳工作浓度，
但是，对于抗原抗体而言，由于它们被稀释成不同浓度，那么在理论上，每个抗原稀释度下，总有一个抗体的稀释度其OD值在1.0左右，那么到底选取哪一个OD值1.0左右的好呢？这就需要同时用**做个抑制来看，也就是说,每个抗原抗体稀释度下,需要同时做间接及间接竞争ELISA.哪个浓度下抑制情况好，就取哪个抗原抗体浓度做工作浓度.

我碰到过所有孔都一样蓝的情况，从两方面找原因了：
一是调整酶的浓度。ELISA反应中酶是关键因素之一，酶浓度高会导致P/N比拉不开。处理：在别的条件不变的情况下，对酶做梯度稀释，10倍一个梯度。酶稀释到了合适的浓度，结果一下就好看了。
二是排除封闭不好的问题。我用过自己配的BSA封闭和国外试剂盒配的封闭液，虽不是天上人间的差别，至少也是清晰与模糊的距离。这个虽然不是关键问题，在试验不好又找不到突破的时候，也别放过可能的失误吧。

包被浓度一般通过方阵ELISA来确定。
经典的方阵ELISA是将抗原和抗体各自稀释成不同梯度浓度，结果将OD值P/N>2的均判为阳性，选取OD值在1.0左右的那个Ag-Ab浓度为*佳工作浓度，
但是，对于抗原抗体而言，由于它们被稀释成不同浓度，那么在理论上，每个抗原稀释度下，总有一个抗体的稀释度其OD值在1.0左右，那么到底选取哪一个OD值1.0左右的好呢？这就需要同时用**做个抑制来看，也就是说,每个抗原抗体稀释度下,需要同时做间接及间接竞争ELISA.哪个浓度下抑制情况好，就取哪个抗原抗体浓度做工作浓度.