ELISA试剂盒实验何时需封闭？

ELISA试剂盒实验何时需封闭？

ELISA试剂盒封闭的手续与包被相似。

*常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。通常蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。

特别是用单抗腹水直接包被时，因其中很多非抗体蛋白在包被时相同也吸附在固相外表，业已起到了相似封闭剂的作用。

但在间接法测定中，封闭通常是不行少的。

封闭是不是必要，取决于ELISA的形式及具体的试验条件。

包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时刻，包被液的pH等应根据试验的特点和资料的性质而选定。

通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置，ELISA试剂盒37℃中保温2小时被认为具有对等的包被作用。

并非一切的ELISA固相均需封闭，封闭不妥反而会使阴性本底增高。

ELISA试剂盒脱脂奶粉也是一种杰出的封闭剂，其*大的特点是价廉，能够高浓度运用（5%）。

抗体和蛋白质抗原通常采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。

高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂运用，但因为奶粉的成份杂乱，而且封闭后的载体不易长时间保存，因此在试剂盒的制备中较少使用。

封闭（blocking）是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的进程。

通常说来，双抗体夹心法，只需酶符号物是高活性的，操作时洗涤完全，不经封闭也可得到满足的成果。

ELISA试剂盒抗原或抗体包被时所用的浓度较低，ELISA试剂盒吸收后固相载体外表尚有未被占有的旷地闲暇，封闭即是让很多不相关的蛋白质充填这些旷地闲暇，然后排挤在ELISA这以后的步骤中搅扰物质的再吸附。

包被好的ELISA板枯燥后放入密封袋或锡袋中，在低温可保存数月。

ELISA试剂盒包被的*恰当浓度随载体和包被物的性质可有很大的改变，每批资料需经过试验与酶联系物的浓度和谐选定。