产品名称：NK-92MI人恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞

收到NK-92MI人恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

NK-92MI人恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞细胞描述
NK-92是从一位患有急进性非霍奇金**瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株白细胞介素-2依赖型NK细胞株。 NK-92MI是转染得到的源自NK-92的IL-2非依赖的NK细胞株。 亲本细胞通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2 cDNA进行转化。 可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。 这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562和Daudi细胞。 NK-92细胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面标记阳性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株CRL-2407(NK92)及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株CRL-2409(NK-92CI)都可从ATCC得到。NK-92MI 和 NK-92CI这两个变种都包含、表达并合成hIL-2 cDNA。 NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。 1998年九月提交到ATCC的培养物污染了支原体。 其后代通过BM 细胞周期蛋白处理21天消除支原体。 处理后六周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测。 结果都呈阴性。
 
动物种别
人
 
性别
男
 
组织来源
恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞, 
 
形态
**母细胞
 
培养基和添加剂
MEMα+培养基(GIBCO,货号11900024，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇 43.2mg/L, 叶酸 8.82mg/L,β-巯基乙醇 7.8mg/L)，75%；马血清， 12.5%；上等胎牛血清，12.5%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。
 
供应限制 A。仅供研究之用。 

NK-92MI人恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞传代方法：
 收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶**后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，NK-92MI人恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代；2~3天1次。 
。
注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造
成生长不好。
冻存方法：   冻存液：基础培养基+5%DMSO+20%FBS 
储存：液氮储存
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