产品名称：重组蛋白纯化

重组蛋白纯化

• 物种人、大鼠、小鼠、兔子)
• E.coli
• 内**水平<1.0EU/µg(LAL法测定)
• 亚细胞定位n/a
• 预测分子量22.5kDa
• 实际分子量-(差异分析请参阅说明书)
• 片段与标签Thr19~Ser183 with N-terminal His Tag
• 缓冲液成份磷酸盐缓冲液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
• 性状冻干粉
• 纯度>95%
• 等电点-
• 应用                   SDS-PAGE; WB; ELISA; IP

  重组蛋白纯化用法

  PBS或其它。

  储存

  避免反复冻融。2-8°C不超过一个月，-80°C不超过12个月。

  稳定性

  热稳定性以损失率显示。损失率是由加速降解试验决定，具体方法如下：在37°C孵育48小时，没有显著的降解或者沉淀产生。保质期内，在适当的条件下存储，损失率低于5%。
  Recombinant Coxsackie And Adenovirus Receptor一、融合表达蛋白的纯化：
  融合表达蛋白可以在原目标分子之外带有GST肽段或（His）6肽段，从而使得可以分别用Glutathione Sepharose凝胶或Chelating Sepharose凝胶进行亲和色谱分子，一步可以达到~90%的纯度，经过特异蛋白酶切后，重组蛋白纯化再进行离子交换及高分辨凝胶过滤一般便可以达到所需的纯度（95~99%）。
  二、包含体表达蛋白的纯化：
  在E.coli系统表达重组蛋白，表达量高时，常形成包含体，包含体易于与细胞其他组分分离，但需要注意的是蛋白复性的步骤。一般采用盐酸胍溶解包含体蛋白后，用稀释的办法进行复性，也可以利用凝胶过滤色谱进行复性（已有多种凝胶可以促进蛋白质的复性的报道）。以下以rhGM-CSF（重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）的下游纯化工艺为例：
  E.coli细胞，超声破碎，离心收集包含体，用7mol/L盐酸胍溶解包含体蛋白，作1：70稀释使蛋白复性，加硫酸铵至一定浓度后，上样于Phenyl-Sepharose 6 FF（high sub）色谱柱，活性组分再上Q-Sepharose FF进行离子交换，*后上Superdex 75 prep grade凝胶进行凝胶过滤色谱，重组蛋白纯化*终获得了纯度较高的rhGM-CSF，同时，DNA及内**去除率均很高。如下表所示：
  步骤 体积（ml）蛋白（mg）内**（EU/ml）DNA（pg/ml）
  起始（复性样品）4344 490 421 180
  HIC疏水柱 880 220 243 0.46
  AIEX阴离子交换 620 88 251 0.14
  GF凝胶过滤 1045 62 9 0.08
  三、周质表达的蛋白的纯化：
  重组蛋白纯化可用渗透压休克方法，使周质释放，然后利用扩张床技术将含有菌体的悬液直接上柱（STREAmlINE系列凝胶），菌体穿过而表达的蛋白上柱。