产品名称：Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶

Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶

产品描述

  Hieff^TM Taq Plus DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性 (校对活性)的蛋白组成的混合酶。其保真性是Taq DNA Polymerase的5倍，且具有更强的扩增性能。一般情况下，使用HieffTM Taq Plus DNA Polymerase可以得到更高的扩增产量。有些Taq DNA Polymerase不能扩增的片段，HieffTM Taq Plus DNA Polymerase可以正常扩增。PCR产物的3’端带A，可克隆至T载体。产品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶产品信息

Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位 (U)。
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg λ-Hind III在74℃下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测：50 μl体系中，加入2 U本酶，以ddH2O为模板，扩增E. coli 16 s rDNA基因。35个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl PCR体系中加入1.25 U本酶，以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin gene。30个循环后将1/10PCR产物进行1 %琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的1 kb条带。

 Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶应用实例

a对于大多数PCR反应，Mg²⁺*佳终浓度为1.5-2 mM。体系中已含有终浓度为1.5 mM的Mg²⁺，如有需要，可用25 mM MgCl₂以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg²⁺*佳使用浓度。

b推荐仅当扩增片段GC含量> 60%且优化条件也无法正常扩增时使用；可能会降低保真度。

c不同模板*佳反应浓度有所不同，下表为50 μl反应体系推荐模板使用量：

1.        PCR反应条件设置：

*退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

Hieff™ Taq Plus DNA Polymerase改进型DNA聚合酶 注意事项

1. 操作注意事项
由于Taq Plus DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，建议在冰上配制PCR反应体系，再置于PCR仪上进行扩增。这样可以减少非特异扩增，有利于提高扩增的特异性，得到良好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
1）引物3’端*后一个碱基*好为G或者C；
2）引物3’端*后8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。