- 入驻时间： 2015-11-06
- 联系人：顾磊
- 电话：021-60514606
-
联系时，请说明易展网看到的
- Email：shybio@126.com
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (With Dye)
产品描述
2×HieffTM PCR Plus Master Mix (With Dye)包含Taq Plus DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Mix中含有电泳缓冲液和染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。体系中加入的保护剂使得 Master Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (With Dye)产品信息
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (With Dye)运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的1 Kb条带。
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (With Dye) 应用实例
1. 反应体系配制（50μl）：
§ 针对不同模板的*佳反应浓度有所不同，下表为50μl反应体系推荐模板使用量，仅供参考。
2. PCR循环反应条件
* 退火温度需要根据引物的Tm值调整，一般设置成低于引物Tm值1
2×Hieff™ PCR Plus Master Mix (With Dye)注意事项
1. 操作注意事项
由于Taq Plus DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性，PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增，有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1 引物3’端*后一个碱基选择C或G；
2.2 引物3’端*后8个碱基应避免出现连续错配；
2.3 引物3’端尽量避免发卡结构的出现；
2.4 引物Tm值控制在55℃-65℃之间；
2.5 引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
2.6 引物GC含量控制在40%-60%之间；
2.7 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
