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Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒
产品描述
动物组织直接PCR试剂盒是一种可直接对不同动物组织进行PCR扩增的试剂盒,适应性广、稳定性强。试剂盒中采用独特的裂解缓冲液体系,可以简便快速的裂解多种动物组织样品并释放出基因组DNA。整个过程不需要除去蛋白、RNA及其它次生代谢物,也无需有机溶剂抽提,即可得到质量稳定的基因组DNA,无需后续纯化步骤即可直接用于PCR反应。而且样品需求量小,少到5mg动物组织即可进行实验。
试剂盒中提供的 2×Tissue Master Mix 具有很强的扩增兼容性,能直接以待测样品裂解液为模板,进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合物,包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分,并以dUTP替代了dTTP,另外加入了能够降解含有dUTP 模板的 UNG 酶(Uracil-N-glycosylase)。在PCR反应前,利用UNG酶降解含有尿嘧啶的PCR产物,UNG 酶对不含有尿嘧啶的模板不会造成任何影响,从而保证扩增的特异性和准确性,防止了大规模基因检测时可能出现的PCR产物污染问题。优化的2×Tissue Master Mix与直接裂解液配合使用能够快速简便地对样品进行检测,并具有灵敏度高、兼容性强、特异性强、稳定性好等特点。
该试剂盒可用于转基因型鉴定、动物基因分型等多种大规模基因检测。
*2 × Tissue Master Mix中包含Tissue Taq DNA 聚合酶、UNG酶、dNTP(dUTP替代了dTTP)、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂、优化剂和稳定剂。
Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒运输方法
冰袋(wet ice)运输。
保存方法
① 本试剂盒的10126-A【2×Tissue Master Mix】保存在-20℃,避免反复冻融。
② 10126-B【Buffer AL】在常温干燥条件下,可保存12个月,如需保存更长时间可置于4℃。
③ 10126-C【Protease】溶液具有独特配方,常温保存(25℃)可长期具有活性,在4℃保存,其活性和稳定性会更好,因此建议将其置于在4℃保存,请勿置于-20℃保存。
Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒注意事项
1)本试剂盒适用于常规PCR,请勿用于多重PCR鉴定;建议扩增片段在1kb以内。
2)注意实验用具的清洁以及实验的操作手法,避免样本间的交叉污染。
3)建议采用新鲜采取的动物组织,若为长期冷冻组织,应尽量避免反复冻融,否则会导致模板的降解,影响PCR效率。
4)Buffer AL若低温保存,容易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间,也可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀,混匀后再使用。
5)电泳检测时,切勿使用含有 SDS 的 Loading Buffer,否则在电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带,影响实验结果。
6)建议设立阳性及阴性对照反应。阳性对照可用50ng纯化的动物DNA为模板,阴性反应以ddH2O为模板,引物可采用以前成功扩增的引物。
7)为了您的**和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒操作方法
1. 取5-10mg动物材料,置于离心管中。尽量剪碎动物材料,以使之后的酶解反应容易进行。
2. 取100μl Buffer AL并加入4μl Protease,涡旋混匀。
3. 向混合液中加入动物组织,涡旋混匀。
4. 65℃孵育10-30min,然后95℃处理5min。
【注】:65℃孵育,一般只需10min即可满足多数PCR需求。若需要的DNA量较大或样品较难酶解,可以将时间延长至30min。组织块不需完全酶解,残余的部分在后续离心步骤中可被除去。
5. 12,000 rpm (~13,400×g )离心5min。
6. 转移上清至新的离心管,4℃或-20℃放置备用或直接用于PCR扩增。
【注】:用于后续PCR检测时,模板量占PCR体系的1-10%之间*佳,不能超过20%。如50μl 的PCR体系中,加入0.5-5μl 裂解液即可,但不能超过10μl。
7. PCR反应体系配制*
按照下表配制PCR反应体系,配置好反应体系后,短暂涡旋充分混匀并瞬时离心,将所有试剂收集到管底。
【*】:① 配制的PCR反应体系可根据所需终体系(如50μl)按照该比例进行调整。
② 通常引物终浓度为0.2-0.25μM可以得到较好结果。反应性能较差时,可以在0.1-0.5μM范围内调整引物浓度。
8. PCR反应条件设置
此表PCR反应条件仅供参考。PCR反应条件因模板、引物等的结构条件不同而各异。具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来优化*佳的反应条件,包括退火温度,延伸时间等。
Animal Tissue Direct PCR Kit 动物组织直接PCR试剂盒【注】:a. PCR程序中的退火温度需根据引物的Tm值自行设置;
b. 延伸时间需要根据片段的长度来确定,对于1kb以内的DNA片段,建议延长时间为30sec。