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D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素钠盐
产品描述
D-荧光素(D-Luciferin)是荧光素酶(Luciferase)的常用底物,普遍用于整个生物技术领域,特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下,荧光素(底物)能够被氧化发光。当荧光素过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性(见下图)。将携带荧光素酶编码基因(Luc)的质粒转染入细胞后,导入研究动物如大小鼠体内,之后注入荧光素,通过生物发光成像技术(BLI)来检测光强度变化,从而实时监测**发展状态或**的**功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响,根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。
D-荧光素也常用于体外研究,包括荧光素酶和ATP水平分析;报告基因分析;高通量测序和各种污染检测。目前市场上有三种产品形式,D-荧光素(游离酸),D-荧光素钠盐,以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素(游离酸)水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱,除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇(10 mg/ml)和DMSO(50 mg/ml)。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中,使用方便,溶剂无毒性,特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品,在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。
D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素钠盐产品性质
D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素钠盐运输和保存方法
冰袋运输。-20℃干燥避光保存。
D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素钠盐使用方法
1.体外生物发光检测
1)用蒸馏水溶解D-荧光素钠盐,配制成100 mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。
2)用预热好的组织培养基1:200稀释储存液,配制工作液(终浓度150µg/ml)。
3)去除培养细胞的培养基。
4)待图像分析前,向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析。
D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素钠盐2. 活体成像分析
1)用无菌的PBS(w/o Mg2+)或者DPBS(w/o Mg2+)配制D-荧光素钠盐工作液(15mg/ml),0.2µm滤膜过滤**。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。
2)注射量取决于注射方式,具体如下:
3) 注射入体内10-20 min(待光信号达到*强稳定平台期),再进行成像分析。
注:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定*高信号检测时间和信号平台期。
D-Luciferin, Sodium Salt D-荧光素钠盐注意事项
1) 本品(firefly luciferin)和甲虫荧光素(beetle luciferin)都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid,仅仅是不同公司在命名上的差异。
2) 本品保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤**后,可以-20℃或-80℃分装冻存,避免反复冻融。如果有条件,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长,长达1年。
3) 注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定*佳信号平台期和*佳的检测时间。
4) 为了您的**和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。