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cDNA文库构建试剂盒
产品及特点
利用真核生物的各种组织或细胞中的Poly(A)+ RNA合成cDNA,然后进行基因克隆,这在分子生物学实验中被广泛应用。这一技术的使用,使基因的结构解析及目的蛋白的表达等变得更为方便。一般合成cDNA以及构建cDNA Library的方法为: ① 合成与目的Poly(A)+ RNA相互补的双链cDNA;② 将双链cDNA与**或病毒来源的载体进行重组; ③ 将重组体导入**或真核细胞内进行扩增, 构建cDNA Library。构建成的cDNA Library可以用于cDNA的解析,或者进一步进行体外转录或体外翻译等。本试剂盒是以动植物由来的Poly(A)+ RNA为模板合成双链cDNA后,将双链cDNA与Plasmid Vector进行重组,构建质粒cDNA Library的试剂盒。试剂盒中使用的载体pAP3neo含有SV40启动子,可以在哺乳动物细胞内进行表达 具有下列特点:
cDNA文库构建试剂盒1. 操作简便:使用Ready-to-Use型试剂。
2. 高灵敏度:能够高灵敏度地检出凋亡细胞的片断化DNA。
3. 高特异性:抑制完整的染色体DNA的混入,选择性地提取断片化DNA。
4. 快速操作:整体操作约需2.5小时。
5. 定 量 性: 与荧光色素组合可以对片断化DNA进行定量。
6. 安 全 性: 不使用苯酚氯仿等。
使用及效果
详细使用步骤请参见使用手册。
cDNA文库构建试剂盒备注
*1 Oligo(dT)18 Anchor Primer中含有Not I Site及Xho I Site,如果不用Not I而用Xho I进行酶切时,也可以制备EcoR I-Xho I双链cDNA片段构建cDNA文库(此时不能使用本试剂盒中的pAP3neo载体)。本试剂盒中不含有Xho I酶,需要时请另外购买。详细情况请参考补充说明。
*2 与cDNA Synthesis Kit(M-MLV Version)中所含有的组份不同。
*3 EcoR I、Not I酶切后的载体。EcoR I酶切端具有磷酸基团,Not I酶切端已经被去磷酸化,不具有磷酸基团。
*4 本试剂盒中的Control RNA是以pSPTet3质粒(质粒中的SP6启动子下游插入长约1.4 kb的pBR322来源的DNA片段,该DNA片段上含有抗四环素基因)为模板,由SP6 RNA聚合酶经体外转录而得到的,Control RNA(约1.4 kb)的3’端具有30个A碱基的Poly(A)+尾。以这种RNA为模板合成的双链cDNA插入到适当的质粒载体中后,如果插入的cDNA确实为全长,那这种质粒便可获得四环素抗性。
*5 可用于Insert Check及DNA测序。T3 Promoter Primer(for pAP3neo)是pAP3neo载体的专用序列,与商品化的T3 Primer序列不同,不能用商品化的T3 Primer对pAP3neo载体进行测序。试剂盒中Primer和Adaptor的碱基序列请
参考“补充说明”。
*6 需要-80℃运输和保存。
cDNA文库构建试剂盒120406-15 柱式植物叶绿体DNAout 15次
70904B-1.5P 酵母tRNA溶液B(精提) 1.5mL
80802A-100P 非冻型拭子DNA保存液A(无拭子) 100mL
71201-50P 柱式动物RNAout 50次
90805-9(原90805-600) 即用型PCR试剂盒3.0 9ml
60906-50(限7折) cDNA**链合成试剂盒(限7折) 50次
70701-50P 柱式病毒DNAout 50次
18-0790-100 多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒 100管/48样
3090-250p 天净沙RNase**剂A型(固相RNase**剂) 250mL
71203-50P 柱式植物RNAout 50次
101005-100 即用型易错PCR试剂盒 100次
60804-1p PCR抑制物**剂 1mL
3090-250P 固相RNase**剂 250mL
71206-50P 柱式动物DNAout 50次
3060-250 非冻型组织RNA保存液 250mL
3092-100P 溴化乙锭**剂 100次
RNA系列
3060-100/250 非冻型组织RNA保存液 100 mL/250ml 390/790
111202-10/100 非冻型血液RNA保存液 10 mL/10ml 150/690
80601-100/250 非冻型**RNA保存液 100 mL/250ml 490/990
3070-100/250 动物RNAout(TRIzol) 100 mL/250ml 390/790
71201-250 柱式动物RNAout 250次 1990
71202-50 柱式血液RNAout 50次 890
101121-50 柱式软骨RNAout 50次 990
81102-30 石蜡包埋组织RNAout 30次 890
81220-50 柱式昆虫RNAout 50次 990
101113-50 柱式软体动物RNAout 50次 1290
71203-50 柱式植物RNAout 50次 890
120504-5 大提柱式藻类RNAout 5次 1290