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虾碱性磷酸酶
产品及特点
Shrimp Alkaline Phosphatase(SAP)虾碱性磷酸酶与大肠杆菌由来的酶同样,催化所有磷酸单酯的水解,不能催化磷酸二酯以及磷酸三酯的水解,也能催化 ATP 等焦磷酸键水解。 但该酶与大肠杆菌由来的 BAP以及小牛肠由来的CIAP不同,通过65℃,15分钟的热处理,可使酶完全不可逆失活。其作用原理图如下:
虾碱性磷酸酶它具有下列特点:
1. 去除DNA片段的 5’-末端的磷酸基。防止线状DNA的自身环化(Self-Ligation)。
2. 除去PCR反应后残存的dNTP。PCR产物进行测序时,在反应体系中如果有多余的 Primer 和dNTP,将影响测序反应的正常进行。使用 Exonuclease I 分解残存的 Primer;用 SAP 处理可降解多余的 dNTP,之后不需要对 PCR 产物进行精制,立即可以进行测序反应。
活性单位定义
在 37℃、pH9.8 的条件下,1 分钟内水解对硝基苯磷酸盐( p-nitrophenolphosphate ) 生成 1 μ mol 的对硝基苯酚(p-nitrophenol)所需要的酶量定义为 1个活性单位(U)。
虾碱性磷酸酶纯度
1. 5 U的本酶和1 μg的λDNA-Hind III片段在37℃、pH7.5的条件下反应1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
2. 5 U的本酶和1 μg的16S,23S rRNA在37℃、pH7.5的条件下反应1小时,
RNA的电泳谱带不发生变化。
使用及效果
碱性磷酸酶(虾)的去磷酸反应 ,在微量离心管中配制下列反应液,全量定容至50 μl。
DNA Fragments in TE Buffer 1~20 pmol
SAP(2 U/μl) 1~2 μl
10×SAP Buffer 5 μl
dH2O up to 50 μl
37℃反应 15 分钟 ,65℃反应 15 分钟 ,添加2.5 μl的 3 M NaCl ,加入125
μl(2.5倍量)的冷无水乙醇,-20℃放置 30~60 分钟 ,离心回收沉淀,加入 200
μl的 70%冷乙醇洗净沉淀后,减压干燥,用 20 μl 以下的 TE Buffer溶解沉淀。
虾碱性磷酸酶130844-50 柱式分支杆菌RNAout 50次 1490
3073-50 一管式病毒RNAout 50次 790
71001-50 柱式病毒RNAout 50次 990
3090-100 固相RNase**剂 100 mL 450
90904-50 膜结合DNA**试剂盒 50次 490
81027-50 TRIzol伴侣 50次 390
3660-100/250 非冻型组织DNA保存液 100 mL/250ml 490/990
60910-100/250 非冻型血液DNA保存液 100 mL/250ml 490/990
90315-15/100 非冻型尿液DNA保存液 15 mL/100ml 120/490
91103-100 非冻型拭子病毒保存液 100 mL 390
80802A-100 非冻型拭子DNA保存液A(无拭子) 100 mL 390
80802B-100 非冻型拭子DNA保存液B(有拭子) 100 mL 490
70603-100 土壤腐殖酸**剂 100 mL 490
70302-100 一步离心式石蜡**剂 100次 290
90901-200 菌体内****剂 200 mL 240
101118-100 病毒沉淀剂 100 mL 690
动物总DNA提取
71206-50 柱式动物DNAout 50次 490
81101-50 柱式昆虫DNAout 50次 690
60306-50 柱式血液DNAout 50次 490
80805-50 柱式毛发DNAout 50次 790
111201 痰液DNAout 50次 990
91102-50 柱式骨骼DNAout 50次 990
80801-50 柱式拭子DNAout 50次 590
60501-20 一管式拭子DNAout 20次 90
70502-30 石蜡包埋组织DNAout 30次 690
121102-50 柱式鼠尾基因组DNAout 50次 490
60602-50 柱式植物DNAout 50次 390
101116-50 柱式植物油DNAout 50次 990
100932-1 溶壁酶干粉 1 g 997
100917-5 蜗牛酶干粉 5 g 296
100919-100 消解酶(溶细胞酶) 100 mg 290
130990-50 酵母DNAout 50次 690