产品名称：牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)核酸检测试剂盒(PCR法)

牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)核酸检测试剂盒(PCR法)实验的建立步骤

1、样品准备区　　这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：　　1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。　　2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。　　3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。　　4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作，以防止在吸取样品时有气溶胶**。　　5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。　　6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。　　7)任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间，经常清洗。

2、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)核酸检测试剂盒(PCR法)样品准备和RNA-PCR　　RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。

3、前PCR区　　必须有专门用于准备各种反应的区域，这个区域必须保持干净，而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备，特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。

4、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)核酸检测试剂盒(PCR法)实验室试剂的操作 1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。　　2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压**。　　3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。　　4)所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。　　5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性**的瓶子和管子。　　6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。　　7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

5、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)核酸检测试剂盒(PCR法)在前PCR区建立PCR混合物　　1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃，在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。　　2)如果你的实验室使用多套引物，以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济，可以考虑分装保存够**的PCR成分。　　3)作为一个规则，应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且，你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。　　4)阴性样品要与每组样品同时做，以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染，阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。　　5)当做阳性对照时，有两个理由决定了应该使用*少数量的核酸。　　6)由于必须有对照反应，对照模板的特点应该予以考虑。

6、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)核酸检测试剂盒(PCR法)后PCR区　　PCR完成以后，需要分析样品并解释数据，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的，决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。7、控制污染的方法　　已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG，这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线，这种方法不能完全消除污染问题，但可以将污染降低几个数量级。XY100844PCR优化试剂盒1套XY90302氯化锰溶液，PCR级5mLXY70905明胶溶液，2%，PCR级1.5mLXY61203高GC DNA**剂，PCR级1.5mLXY130307二氯化锰溶液，25mM，PCR级5mLXY130840硫酸镁溶液，10mM，PCR级5mLXY130841石蜡油，PCR级10mLXY80205DMSO，PCR级1.5mLXY130506海藻糖溶液，1.5M，PCR级1.5mLXY70902甜菜碱溶液，5M，PCR级1.5mLXY70909绿如蓝染料，PCR级0.1mL|1mLXY51208dNTP溶液，10 mM0.5mL(B)|5mL(B)XY131038dUTP溶液，100 mM0.4mLXY130920dITP溶液，100mM0.5mLXY120615dATP溶液，100mM0.5mLXY120617dTTP溶液，100mM0.5mLXY120619dGTP溶液，100mM0.5mLXY130917dCTP溶液，100mM0.5mLXY131139Deaza dGTP溶液，5mM0.4mLXY131140双脱氧dNTP溶液，10mM40uL×4XY131141dNTP和引物**剂100次XY131212PCR Mix染料10mLXY60901可逆型Taq DNA聚合酶抑制剂0.3mLXY130815Taq酶抗体250U|1000UXY130601DNA 修复混合液30次|150次XY70802即用型PCR试剂盒2.0100次|600次XY90805即用型PCR试剂盒3.0100次|600次XY130986即用型热启动PCR 试剂盒1.5次XY130985免DNA提取PCR试剂盒100次XY101005即用型易错PCR试剂盒100次XY90702即用型长片段PCR试剂盒20次XY90708即用型高保真PCR试剂盒1.5mL|9mLXY130605即用型多重 PCR试剂盒50次XY90408即用型荧光定量PCR试剂盒100次|600次XY130816Real-Time PCR稀释液1mlXY130817ROX参考染料，高浓度型200μlXY100931ROX参考染料，低浓度型5μgXY60906cDNA**链合成试剂盒10次|50次XY130911miRNA cDNA**链合成试剂盒25次XY131042miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒25次XY131005cDNA**链合成试剂盒30次XY130308一管式双链cDNA合成试剂盒10次XY100814Oligo dT12-18引物5μgXY1004096 nt随机引物5μgXY13122710 nt随机引物5μgXY1206796nt随机引物(抗水解)100μLXY80206两管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)50次XY91202双酶一管式RT-PCR试剂盒(MMLV-Taq)50次XY130609一步式RT-PCR Mix1mLXY130957免RNA提取RT-PCR试剂盒100次XY101219即用型荧光定量RT-PCR试剂盒50次XY100941通用型全基因组扩增试剂盒30次XY100938单细胞全基因组扩增试剂盒30次XY100940石蜡包埋组织全基因组扩增试剂盒30次XY100942单孢子全基因组扩增试剂盒30次XY100947环状DNA全基因组扩增试剂盒30次XY100203通用型LAMP试剂盒50次XY101114通用型RT-LAMP试剂盒50次XY130923LAMP扩增阳性对照50次XY130833LAMP可见光染料1mLXY131179核酸稀释液，测OD专用100mLXY131083Ribo-SPIA cDNA 扩增试剂盒20次XY91106T7体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY91107SP6体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY91108T3体外转录试剂盒50次(A)|50次(B)XY130694m7G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY130695m7G(5′)ppp(5′)A 帽结构类似物25ODXY130696G(5′)ppp(5′)A 帽结构类似物25ODXY130697G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY1306983′-O-Me-m7G(5′)ppp(5′)G 帽结构类似物25ODXY70906NTP溶液，10 mM0.5mLXY120625ATP溶液，100mM0.25mLXY120626UTP溶液，100mM0.25mLXY120628GTP溶液，100mM0.25mLXY120627CTP溶液，100mM0.25mLXY130832通用型MLPA试剂盒20次XY130551单细胞RNA扩增试剂盒80次XY130803单细胞裂解液(DNA)1mLXY130804单细胞裂解液(RNA)1mLXY130805单细胞悬浮液1mLXY130806胚胎裂解液1mLXY131128动物种属鉴定PCR Mix100次XY131129植物种属鉴定PCR Mix100次XY131130**种属鉴定PCR Mix100次XY131131**种属鉴定PCR Mix100次XY30常用PCR引物100uL
基因结构和功能
YB100212 一管式点突变试剂盒 10次
YB130823 多点突变试剂盒 20次