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羊肺炎支原体(MO)核酸检测试剂盒(PCR法)实验的建立步骤
1、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施: 1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。 2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取DNA或RNA。 3)用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。 4)DNA样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶**。 5)大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。 6)管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。 7)任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、羊肺炎支原体(MO)核酸检测试剂盒(PCR法)样品准备和RNA-PCR RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
3、前PCR区 必须有专门用于准备各种反应的区域,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前PCR区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前PCR区的正压活塞式移液管。
4、羊肺炎支原体(MO)核酸检测试剂盒(PCR法)实验室试剂的操作 1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。 2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压**。 3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。 4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。 5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性**的瓶子和管子。 6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。 7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、羊肺炎支原体(MO)核酸检测试剂盒(PCR法)在前PCR区建立PCR混合物 1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。 2)如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够**的PCR成分。 3)作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和PCR前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。 4)阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在PCR产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。 5)当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用*少数量的核酸。 6)由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、羊肺炎支原体(MO)核酸检测试剂盒(PCR法)后PCR区 PCR完成以后,需要分析样品并解释数据,应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。后PCR活动中使用的所用试剂、一次性耗材和仪器都必须是专门用于这一目的,决不能把实验室这一区域的试剂或仪器用于任何前PCR活动。7、控制污染的方法 已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用UNG,这一技术能有效地消除由PCR产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。YB001 新城疫凝胶PCR试剂盒 NDV 10次/盒
YB002 禽流感病毒H5凝胶PCR试剂盒 AIV-H5 10/40次
YB003 禽流感病毒H7N9凝胶PCR试剂盒 AIV-H7N9 10/40次
YB001 猪瘟凝胶PCR试剂盒 CSFV 10/40次
YB002 猪蓝耳凝胶PCR试剂盒 PRRSV 10/40次
YB003 口蹄疫凝胶PCR试剂盒 FMDV 10/40次
XY001结核杆菌荧光定量PCR检测试剂盒 TB40/96次XY002牛病毒性腹泻/粘膜病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 BVDV40/96次XY003牛传染性鼻气管炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒 IBRV40/96次XY004布鲁氏菌荧光定量PCR检测试剂盒 BS40次/盒XY005炭疽杆菌荧光定量PCR检测试剂盒 BA40次/盒XY006口蹄疫通用型荧光定量PCR检测试剂盒 FMDV40次/盒XY007口蹄疫A型荧光定量PCR检测试剂盒 FMDV-A40次/盒XY008口蹄疫O型荧光定量PCR检测试剂盒 FMDV-O40次/盒XY009口蹄疫亚I型荧光定量PCR检测试剂盒 FMDV-I40次/盒XY010副结核荧光定量PCR检测试剂盒 paratuberculo sis40次/盒XY001禽流感病毒(即A型禽流感)通用型荧光定量PCR检测试剂盒 AIV-M40/96次XY002禽流感病毒H5亚型荧光定量PCR检测试剂盒 AIV-H540/96次XY003禽流感病毒N1亚型荧光定量PCR检测试剂盒 AIV-N140/96次XY004禽流感病毒H7亚型荧光定量PCR检测试剂盒 AIV-H740/96次XY004-1禽流感病毒H7N9荧光定量PCR检测试剂盒 AIV-H7N924/40次XY005禽流感病毒H9亚型荧光定量PCR检测试剂盒 AIV-H940/96次XY006新城疫病毒通用型荧光定量PCR检测试剂盒 NDV40/96次XY007新城疫病毒(中强毒株)荧光定量PCR检测试剂盒 NDV-vm40/96次XY008禽传染性法氏囊病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 IBDV40/96次XY009禽传染性****病毒荧光定量PCR检测试剂盒 IBV40/96次XY010禽马立克氏病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 MDV40/96次XY011禽J亚型禽白血病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 ALV-J40/96次XY012禽网状内皮组织增殖病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 REV48次/盒XY013禽流感通用型和新城疫病毒通用型(二合一)荧光定量PCR检测试剂盒 AIV-M和NDV48次/盒XY001鲤春病毒血症荧光定量PCR检测试剂盒 Rhabdovirus carpio40次/盒XY002传染性胰脏坏死病毒荧光定量PCR检测试剂盒 IPNV40次/盒XY003病毒性出血性败血症荧光定量PCR检测试剂盒 VHS40次/盒XY004对虾白斑病毒荧光定量PCR检测试剂盒 WSSV40次/盒XY001猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒 CSFV40/96次XY002猪瘟野毒病毒荧光定量PCR检测试剂盒 CSFV-UTR40/96次XY003口蹄疫病毒荧光定量PCR检测试剂盒 FMDV40/96次XY004猪蓝耳病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 PRRSV40/96次XY005高致病性猪蓝耳病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 hPRRSV40/96次XY006猪伪狂犬野毒病毒荧光定量PCR检测试剂盒 PRV-gE40/96次XY007猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测试剂盒 PCV40/96次XY008猪西尼罗河热病毒荧光定量PCR检测试剂盒 WNFV40/96次XY009猪乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒 JEV40/96次XY010非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测试剂盒 ASFV40/96次XY011猪细小病病毒荧光定量PCR检测试剂盒 PPV40/96次XY012猪传染性胃肠炎病毒荧光定量PCR检测试剂盒 TGEV40/96次XY013猪流行病腹泻病毒荧光定量PCR检测试剂盒 PEDV40/96次XY014猪轮状病毒A荧光定量PCR检测试剂盒 ROV-A40/96次XY015猪出血性魏氏梭菌荧光定量PCR检测试剂盒 CW40/96次XY016猪钩端螺旋体病荧光定量PCR检测试剂盒 LPP40/96次XY017猪传染性胸膜肺炎放线杆菌荧光定量PCR检测试剂盒 APP40/96次XY018猪传染性萎缩性鼻炎荧光定量PCR检测试剂盒 SAR40/96次XY019猪链球菌病荧光定量PCR检测试剂盒 PSS40/96次XY020猪传染性胃肠炎荧光定量PCR检测试剂盒 TGEV40/96次XY021猪流感病毒H3亚型荧光定量PCR检测试剂盒 SIV-H340/96次XY022猪流感病毒H1亚型荧光定量PCR检测试剂盒 SIV-H140/96次XY023猪流感病毒N1亚型荧光定量PCR检测试剂盒 SIV-N140/96次XY024猪流感病毒N2亚型荧光定量PCR检测试剂盒 SIV-N240/96次XY025SARS病毒荧光定量PCR检测试剂盒 SARS40次/盒XY026狂犬病荧光定量PCR检测试剂盒 RV40次/盒XY027轮状病毒荧光定量PCR检测试剂盒 HRV40次/盒XY028弓形虫荧光定量PCR检测试剂盒 Toxoplasma gondii40次/盒