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收到人视网膜色素上皮细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。
人视网膜色素上皮细胞人视网膜是由位于眼睛后部多层结构组成的。它包括视细胞和视网膜色素上皮细胞(RPE),视网膜色素细胞通过提供营养和代谢废物来滋养视网膜。RPE位于神经视网膜和脉络膜之间,成为血视网膜屏障的外层控制着视网膜下间隙的化学成分,人们发现RPE在许多蛋白质的极性方面不同于其他上皮细胞。几乎所有的上皮细胞的顶生面都没有基质,而RPE的顶生面胞膜是与细胞外基质相接触的。在早期胚胎发育过程中,RPE自发转分化为神经视网膜组织,RPE在其邻近的光感受器的发育和维持中有着重要的作用,光照条件下RPE能产生大量的活性氧,RPE的增殖也是许多眼病发病过程中重要的一步,如增殖性视网膜病变。
人视网膜色素上皮细胞(HRPEpiC)提取于人视网膜组织,于原代冻存。每管含有细胞数>5×105cells/ml,此细胞通过Cytokeratin-18, Cytokeratin-19 and Fibronectin**荧光染色验证,经测试不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、**、酵母和**。细胞可以达到15倍增。
推荐培养基(EpiCM, Cat No 4101)
Reference
[1] Rizzolo, L. J. (1997) Polarity and the development of the outer blood-retinal barrier. Histol Histopathol 12:1057-1067.
[2] Marmorstein, A. D. (2001) The polarity of the retinal pigment epithelium. Traffic 2:867-872.
[3] Araki, M., Takano, T., Uemonsa, T., Nakane, Y., Tsudzuki, M., Kaneko, T. (2002) Epithelia-mesenchyme interaction plays an essential role in transdifferentiation of retinal pigment epithelium of silver mutant quail: localization of FGF and related molecules and aberrant migration pattern of neural crest cells during eye rudiment formation. Dev Biol. 244:358-71.
人视网膜色素上皮细胞传代方法:
收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
(一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶**后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
(二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,人视网膜色素上皮细胞倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基,吸出,分到新的培养瓶中。1:3~1:6传代;2~3天1次。
。
注意:传代后一半用我们的培养基,一半用你们的,以免细胞不适应而造
成生长不好。
冻存方法: 冻存液:基础培养基+5%DMSO+20%FBS
储存:液氮储存
人视网膜色素上皮细胞其它细胞系展示表:
yb-1278 SK-N-SH(神经母细胞瘤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1279 SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1280 COLO 205(结肠癌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1281 T/G HA-VSMC(人主动脉血管平滑肌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1282 HUVEC(人脐静脉血管内皮细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1283 A10(大鼠主动脉血管平滑肌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1284 3T3-L1(小鼠脂肪细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1285 A9(皮下结缔组织细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1286 WEHI 22.1(B**细胞 ). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1287 NIH/3T3(胚胎成纤维细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1288 MC3T3-E1 Subclone 14(小鼠原成骨细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1289 L6(大鼠成肌细胞 ). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1290 H9c2(2-1)(大鼠心肌细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1291 RSC96(大鼠雪旺细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1292 CHO/dhFr-(中国仓鼠二氢叶酸还原酶缺陷细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1293 Lec1(卵巢细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1294 293T/17 [HEK 293T/17] (人胚肾细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1295 AAV-293( 胚肾细胞 ). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1296 hFOB 1.19(SV40 转染成骨细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1297 CCD-1095Sk(皮肤细胞 ). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1298 Hs 578Bst(乳腺细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1299 NK-92(人恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1300 NK-92MI(人恶性非霍奇金**瘤患者的自然杀伤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1301 HMy2.CIR(人B **母细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1302 OK(负鼠(opossum)肾细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1303 FO(骨髓瘤细胞). 品牌ATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周